瓶中，用橡皮塞密封。
（3）氢氧化钠溶液：取2.0g NaOH，加10ml水溶解。
（4）三氯化铝溶液：2.5g无水三氯铝小心地加入无水甲醇550ml中，放置24小时后全溶即得。
（5）醋酸钠：用无水粉状醋酸钠。
（6）硼酸饱和液：将无水硼酸加入适量无水甲醇，制成饱和溶液。
依照上述方法制备的各贮备液，可存放使用6个月。
2．测定方法
精密称取黄酮样品（槲皮素）约1.2mg，用无水甲醇溶解，再稀释至100ml。
（1）黄酮光谱：取样品溶液约3ml置于石英杯（1cm）中，在200~500nm波段内进行扫描，重测一次，视光谱的重现性。
（2）氢氧化钠光谱：取样品溶液约3ml置于石英杯中，加入氢氧化钠2~3滴后，立即进行测定。放置5分钟后，再测定一次。
（3）甲醇钠光谱：取样品溶液约 3ml置于石英杯中，加入甲醇钠溶液5~7滴后，立即进行测定。放置5分钟后，再测定一次。
（4）三氯化铝光谱：在盛有约3ml样品溶液的石英杯中，加入AICI3溶液6滴，放置一分钟后进行测定。测定后，加入3滴盐酸溶液（浓盐酸：水=1：1），再测定一次。
（5）醋酸钠光谱：取样品溶液约3ml置于石英杯中，加入适量的无水醋酸钠固体，杯底剩有约2mm的醋酸钠时，二分钟内进行测定。
实验六 秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定
秦皮为本樨科白蜡树属植物白蜡树（Fraxinus Chinensis Poxb）或苦沥白蜡树（F.rhynchophylla Hance）或小叶白蜡树（F.bungeana DC）的树皮,味苦，性微寒。具有清热、燥湿、收涩作用。主治温热痢疾、目赤肿瘤等症。
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秦皮中含有多种内酯类成分及皂苷、鞣质等，其中主要有七叶苷、七叶内酯、秦皮苷及秦皮素等。多有抗菌消炎的生理活性，七叶内酯对细菌性痢疾、急性肠炎有较好治疗效果，兼有退热作用，毒付作用小，几无苦味。适于小儿服用。
一、秦皮中主要成分的结构及性质
1．七叶苷（esculin），又叫马粟树皮苷：白色粉末状结晶，mp205～206℃。易溶于热水（1：15），可溶于乙醇（1：24），微溶于冷水（1：610），难溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿。在稀酸中可水解。水溶液中有蓝色荧光。
2．七叶内酯（esculetin）：黄色针状结晶，mp276℃。易溶于沸乙醇及氢氧化钠溶液，可溶于乙酸乙酯，稍溶于沸水，几不溶于乙醚、氯仿。
3．秦皮苷（fraxin）：mp205℃。
4．秦皮素（fraxetin）：mp227～228℃。
二、实验原理
七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。
三、实验方法
（一）提取：取秦皮粗粉150g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
（二）分离：在上述浸膏中加40ml水加热溶之。移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干，残留物溶于温热甲醇中，浓缩至适量，放置析晶，即有黄色针状结晶析出。滤出结晶。甲醇、水反复重结晶，即得七叶内酯。
将乙酸乙酯萃取过的水层浓缩至适量，放置析晶，即有微黄色晶体析出。滤出结晶。以甲醇，水反复重结晶，即得七叶苷。
（三）鉴定：
1．化学检识：取七叶苷、七叶内酯各少许分别置试管中，加乙醇1ml溶解。加1tCl3溶
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液2—3滴，显暗绿色，再滴加浓氨水3滴，加水6ml，日光下观察显深红色。
2．薄层鉴定：
吸附剂：硅胶G
样品：七叶苷、七叶内酯标准品及自制七叶苷﹑七叶内酯的醇溶液。
展开剂：甲醇—甲酸乙酯—甲苯（1：4：5）
显色：1）UV254灯下观察，七叶苷为灰色荧光，七叶内酯为灰褐色。
2）以重氮化对硝基苯胺喷雾显色，七叶苷和七叶内酯均呈玛瑙色。
结果：七叶苷Rf=0. 04，七叶内酯Rf=0.28
实验七 薯蓣皂苷元的提取和鉴别
一、目的要求：
1．掌握甾体皂苷元（亲脂性和中性成分）的提取方法。
2．熟悉薯蓣皂苷元的性质及鉴定法。
二、简介：
薯蓣皂苷元（Diosgenin）是一种甾体皂苷元，分子式（C27H42O31）,分子量414.61，为白色结晶，mp204～207℃，[ ]25D-129.3（CHCl3），溶于一般有机溶剂和醋酸，不溶于水。目前，是制造多种甾体药物如口服避孕药（I号，II号避孕药片）和甾体激素（如可的松）等的重要原料。在植物界主要分布在薯蓣科薯蓣属（Dioscorea）植物中，我国的薯蓣属植物有80余种，其中只有薯蓣根茎组（Stenophora）的17种、I亚种及一变种才含有甾体皂苷元，其它则含有多量淀粉，无皂苷元。已用于生产的主要有盾叶薯蓣（D.Zingiberensis C. H. Wright），穿龙薯蓣（D.nipponica Makino），黄山药（D.panthaica prain et Burkil）,紫黄姜(D.nipponica Makinovar rosthani prain et Burk)等。在植物体内薯蓣皂苷元是与葡萄糖、鼠李
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糖结合成薯蓣皂苷（Dioscin）而存在。提取分离时，一般是先用稀酸将薯蓣皂苷水解成薯蓣皂苷元与单糖（葡萄糖、鼠李糖）。因薯蓣皂苷元不溶于水，混存于植物残渣中，故可用有机溶剂（如石油醚）直接从植物残渣中提取出薯蓣皂苷元。
三、提取方法
1．皂苷预试：
方法见“皂苷的鉴别”
①泡沫试验
②李伯曼—布哈德（Liebermann-Burchard）反应
2．薯蓣皂苷元的提取：
注一：检查薯蓣皂苷元是否提尽，可用李伯曼反应，参考实验二“注三”项下。
注二：回收石油醚的方法见实验一“注四”项下。
注三：所得薯蓣皂苷元（粗品）用石油醚抽洗后，即可测定熔点，若熔点不合格时，才进行重结晶。
四、薯蓣皂苷元的鉴定
1．熔点测定：204～209℃
2．薄层层析鉴定：
应只呈现一个与标准Rf值一致的色斑。
样品：白色结晶的无水醇液
标准品：薯蓣皂苷元无水醇液
1）吸附剂：AI2O3软板（中性100～200目，活性Ⅲ级）
展开剂：苯一甲醇（9：1）
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2）吸附剂：硅胶H-CMC硬板
展开剂：石油醚-乙酸乙酯（7：3）
显色剂：10%磷钼酸乙醇溶液。喷雾后加热10～20分钟
3）化学反应：
①Liebermann-Burchard反应
②CHCI3—浓H2SO4试验
③五氯化锑反应（Kahlenberg反应）：与五氯化锑的氯仿溶液呈紫蓝色。
4）制备衍生物：
乙酰化物的制法：取样品100mg溶于3ml吡啶中，加入20ml醋酐，煮沸半小时至一小时后，将反应物倒入冰水中（冬季操作使用冷水即可）。待析出白色晶体后，抽滤，析出物丙酮重结晶即得。mp196～193℃。
5．紫外吸收光谱的测定：
取样品5mg，加入浓H2SO4 10ml，在40℃水浴上加热1小时，放冷，测定。薯蓣皂苷元应有以下最大吸收峰：
λmax 271nm 415nm 514nm
10g 3.99 4.06 3.64
实验八 中草药化学成份的鉴别法
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