1．大黄素（Emodin）：橙黄色长针晶（丙酮中结晶为橙色，甲醇中结晶为黄色），mp256-257℃。几不溶于水，对于下列溶剂的溶介度分别为：四氯化碳0.01%，氯仿0.0718%，二硫化碳0.009%，乙醚0.14%，苯0.0415。易溶于乙醇，可溶于氨水，碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
2．大黄酚（Chrysophanol）:金黄色六角型片状结晶（丙酮中结晶）或针状结晶（乙醇中结晶）。mp 196℃，能升华。易溶于乙醚、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇, 稍溶于甲醇，难溶于石油醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。
3．大黄素6-甲醚，（Emodinmonomethl ether）:金黄色针晶，mp207℃，能升华。可溶于氢氧化钠水溶液，溶解度与大黄酚相似。 4．大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷（Anthraglycosibe A）：黄色针晶（稀甲醇中结晶）mp230-232℃。
5．大黄素3-D-葡萄糖苷（Anthraglycoside B）:浅黄色针晶（稀乙醇中结晶含1分子水mp190-191℃。
6．白藜芦醇（Resveratrol）：无色针状结晶，mp256-257℃，216℃升华，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。
7．白藜芦醇葡萄糖苷（polydotinpeceid）：无色颗粒状结晶，双熔点分别为130-140℃225～226℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水，可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸钠和氢氧化钠水溶液中，稍溶于冷水，难溶于乙醚。
8．β-谷甾醇
9．鞣质：属缩合鞣质，可溶于醇及水，不溶于苯、乙醚、氯仿等。
另外。虎杖叶、茎中含少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷、Vtio等。
二、实验原理：
羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分，均可溶于乙醇中，故可用乙醇将它们取出来。羟基蒽醌类易溶于乙醚等弱极性溶剂，白藜芦醇苷在乙醚中溶解度很小，利用它们对乙醚的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离，再利用各羟基蒽醌类结构上的不同所表现酸性不同，用PH梯度萃取法分离它们。
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三、实验方法：
（一）提取
乙醇总提取物的制备：取虎杖粗粉200g，于1000ml圆底烧瓶中回流，第一次加500ml乙醇回流一小时，第二次加300ml乙醇回流30分钟，第三次加250ml乙醇回流30分钟，合并三次乙醇提取液，放置，如有沉淀可过滤一次，滤液减压回收乙醇至干，得膏状物。
（二）分离
1．亲脂性成分与亲水性成分的分离：
将上述膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后放置，将乙醚液倾于500ml三角瓶中（水层不可倒出），再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾出乙醚液，同法操作六次，合并乙醚液即为亲脂性成分——总游离蒽醌，乙醚提取过的剩余物中含水溶性成分。
2．游离蒽醌分离：
（1）强酸性成分的分高：将上述含总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中，加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取（测5%碳酸氢钠PH值），放置使充分分层，若提取过程中乙醚挥发可补充，分出碱水溶液同法提取二次，合并碱水提取液，在搅拌下缓缓滴加6N盐酸调至pH2注意观察颜色变化，稍放置即可析出沉淀，抽滤，用水洗涤沉淀中性，将沉淀置表面器上干燥，得强酸性成分。
（2）中等酸性成分——大黄素的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液（测5%碳酸钠水溶液的pH值）萃取5～9次，每次40ml，直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液，小心加盐酸调pH3，放置，抽滤，水洗沉淀至中性，抽干，干燥称重。以甲醇一氯仿或苯一氯仿（1：1）重结晶，得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。
注：大黄酚和大黄素6-甲醚二者相互分离比较困难，在本实验薄层条件下为同一斑点，可用层析用磷酸氢钙进行柱层析，以石油醚洗脱，下层黄色带洗脱后，以甲醇重结晶可得大黄酚，上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素6-甲醚。
（3）中性成分——甾醇类化合物分离：氢氧化钠萃取过的乙醚液，用水洗至中性，以无水硫酸钠脱水，回收乙醚得残留物，以甲醇热溶二次（10ml,5ml）过滤合并甲醇液，浓缩，放置结晶，滤取沉淀并用少量石油醚洗涤，再用甲醇重结晶，得β-谷甾醇，mp136～137℃，取少许结晶，做醋酐——浓硫酸反应，观察现象。
（三）鉴定
化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：
A：碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。
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B．醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现袋。
2．薄层鉴定：
吸附剂：硅胶—CMC
展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9)。
显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾。
实验五 芦丁的提取、分离与鉴定
槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾，自古用作止血药物。治疗吐血，痔疮便血、子宫出血、鼻血等症，所含主要成分为芸香苷，又称芦丁（Rutin，维生素P），其含量高达12～16%，有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。
一、目的要求：
1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。
2．掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3．通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：
1． 芦丁（芸香苷，rutin）
淡黄色针晶，水中结晶者含3分结晶水，C27H30O1623H2O 100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，无水物于25℃变棕，115～7℃软化，214～5℃发泡分解，1g芦丁溶于约300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。
2． 槲皮素（Guereetin）
为芦丁的苷元，C15H10O7，MW302.23；含二分子结晶水为黄色针晶，（稀乙醇），5～7℃
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失水，314℃解，1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋一般在碱水中溶解显黄色，几不溶于水。
3． 皂苷（Saponin）
粗品为白色粉末，mp 210℃～20℃（dec）。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解得下列两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
（1）白桦酯醇（Betulin）无色针晶，mp215～2℃，能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水。
槐花二醇（Sophoradiol）无色针晶，mp219~20℃或224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
三、提取分离和纯化
注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。
注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但pH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。
注3：pH过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。
四、芦丁的鉴定
定性反应见附录酮苷的鉴别。
（一）芦丁的酸水解
称取精制芦丁约2g，研细，加H2SO4150ml，投入500ml锥形瓶中，放沸石，直火沸腾后，保持2小时，放冷后抽滤，滤液保留作糖份的鉴定，水洗沉淀后，粗品用95%乙醇大约20ml回流溶解，趁热过滤，放置，加水至50%左右浓度，得黄色针晶。
（二）糖的鉴定
1．纸层析鉴定：取水解母液20ml，于水溶上加热，同时于搅拌下加BaCO3细粉中和至中性，滤BaCO3后，滤液在水浴上浓缩至2~3ml，得样品液，以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照。
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展开剂：正丁酵一醋酸一水（BAW）（4：1：5）上层，上行展开。
显色剂：苯胺一邻苯甲酸试液，喷后105℃烘10分钟。显棕红色斑点。
2．糖脎的制备及鉴定
余下的水解母液小心用45%NaOH液中和、滤除棕红色沉液物，水浴上加热浓缩至约30ml，滤后加1g盐酸苯肼和2gNaAC，沸水浴上加热30~40分钟，析出黄混合糖脎，停止加热冷却，取结晶少许，于是显微镜下观察，鼠李糖脎为簇状针晶，葡萄糖脎扫帚状聚针晶，滤取糖结晶，水洗，干燥后，溶于丙酮，滤除不溶物。滤液加水使呈30%丙酮液，即析出葡萄糖脎抽滤后以少量丙酮重结晶一次，mp209℃，母液加水稀释，析出鼠李糖脎，稀乙醇重结晶，mp135℃。
（三）芦丁和槲皮素的薄层层析鉴定
吸附剂：青岛硅胶G（10~400）以0.4%CMC-Na水液制板，105℃活化1小时。
展开剂：（1）CHCL3-MeOH-HCOOH（15：5：1）
（2）CHCL3-丁酮-HCOOH（5：3：1）
显色剂：1tC13和1%K3[Fe（CN）6]水溶液，应用时等体积混和。
四、槲皮素五乙酰化物的制备
称取精制的槲皮素0.2g，置25ml干燥的锥形瓶中，加6ml醋酐和1滴浓H2SO4，振摇使完全溶解，接上空气冷管，于水浴上加热30分钟放冷，搅拌下倾入100ml冰水中，搅至稀油滴消失，得灰白色的粉末沉淀，放置抽滤，洗涤，用95%乙醇将沉淀重结晶，得无色针晶，为五乙酰化槲皮素，mp192~4℃。
五、光谱鉴定
（一）紫外光谱
利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断化合羟基的位置。
1．试剂配制
（1）无水甲醇：用分析纯的甲醇，加入10êO，放置24小时后，加热回流1小时，回流时冷凝管顶端应安装CaCl2干燥管，然后蒸馏得无水甲醇。
（2）甲醇钠溶液：取金属钠0.25g，切碎，小心加入无水甲醇10ml中，此溶液贮存于玻璃
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