展开剂：C6H5-EtoAc-NHEt2（6：4：1）
显色剂：改良碘化铋钾喷雾
例二：丹参色素的TLC检识
吸附剂：硅胶G-CMc-Na板
样品：丹参乙醚提取液
展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1）
记录TLC结果
实验二 粉防己生物碱的提取分离与鉴定
汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。主要是汉防己甲素和汉防已乙素。临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。
一、目的要求
通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。
1． 生物碱的一般提取方法。
2． 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定
二、已知生物碱的结构和性质
汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。
1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱）
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无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。
2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）
溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离，用不同溶剂重结昌时，其晶形和溶点不同：
乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃
甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃
丙酮 六面粒状晶 mp134℃
吡啶-甲醇 mp 121~2℃
环已烷-EtocAc mp 156℃
3．轮环藤酚碱（Cylanoline）
为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。
三、生物碱的提取分离
1．总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离
注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。
注二：净砂必须事前洗净烘干，拌和量最好不要超过120g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多。提不尽生物碱。
注三：检查生物碱是否提尽的方法，是取最后一次乙醚提取液约数滴，挥去乙醚，残渣加5%HCl 0.5ml溶解后，加改良碘化铋钾试剂一滴，无沉淀折出或明显浑浊时，表明生物碱已提尽，或基本提尽。反之，应继续提取。
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注四：先将提取器内滤纸筒取出。然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾出（另器贮存），再将提取玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶中乙醚于玻筒中，至烧瓶内的乙醚提取液体积较小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出。
2．低压柱层析分离汉防已甲素和乙素
低压柱层析在低压下（0.5~3kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100~200μm）和HPLC（~37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50~75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法。适宜和于天然产物的常量制备性分离。
（1）装柱 减压干法装法，层析柱规格：柱长30cm，内径2cm，共装硅胶约30g（高约22cm）。
（2）拌样加样 取汉防已碱约150mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度）用滴管加到1.5g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2cm高的空白硅胶，再加盖一园形滤纸片，压紧。
（3）洗脱 先检查从空压机至层析柱各阀门管道是否正常，关紧各个阀门，开动空压机至额定压力（5.8kg/cm2）待用。用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂（环已烷-惭酸乙酯-二乙胺/6：2：0.8），当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（共约250ml），迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧（防加压时接头冲开），小心开启空压机阀门，再开针形阀和空气过滤减压器，（注意：压力过大。玻璃柱会炸，一般2kg是安全的，必要时可戴防护面罩）调动所需压力，0.6~1.2kg/cm2，约40分钟后流出，控制流速1ml/分，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约3小时。
（4）检查 各流份分别移入小玻璃蒸发器中，于水浴上浓缩，分别通过TLC检查，吸附剂：硅胶G，展开剂：环已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6：3：1，改良碘化铋钾试剂喷雾显色，以汉防已甲素、乙素为标准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶，测定mp。
四、鉴定方法
1．衍生物制备
取汉防已甲素0.2g，溶于2ml（丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为止，抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚洗涤，乙醇重结晶，得汉防已甲素苦味酸盐，mp 235~242℃（dc）。
2．有机胺碱的TLC
吸附剂：青岛海洋化工厂薄层层析硅胶G，用0.3%CMC-Na水液制板，110℃活化1小时。
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样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③
展开剂：环己烷- EtoAc-NHEt2（6：2：1）
显色剂：改良碘化铋钾试剂（展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰）
现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨认。
实验三 掌叶防己碱的提取与分离及延胡索乙素制备
掌叶防已碱又称巴马汀（palmatine），硫酸延胡索乙素又称消旋四氢巴马汀硫酸盐（dltetrahydro palmatine sulphate）。
延胡索乙素（Corydalis B）为镇静安定药，用于缓解胃系统的疾病所引起的疼痛，临产阵痛、头痛、失眠等。
中药延胡索（元胡，Corydalis yanhusuo W.T. Wang的块根）中含延胡索乙素的量很少，而其脱氢化合物巴马汀在某些植物中含量却很高。在中国华南一带的防已科植物黄藤（Fibreursa recisa paerre）的根茎中含巴马汀，再经氢化反应，制备延胡索乙素。
黄藤曾列入《本草纲目》，李时珍谓“藤生生岭南，状若防已，但人常服此藤，纵饮食有毒，亦自然不发”。现代民间作为清热消炎药。常用于外伤感染、扁桃体炎、咽喉炎、结膜炎、热痢及黄疸等。
一、实验的目的要求：
1．掌握季铵生物碱的一种提取方法。
2．掌握生物碱的一般理化性质及其结构与性质的关系。
3．了解黄藤生物碱的结构与性质的关系。
4．熟悉生物碱沉淀反应的条件和方法。
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5．掌握制备生物碱结晶性盐的方法和精制。
6．掌握四氢巴马汀的制备方法。
二、黄藤中已知成分的理化性质：
黄藤根茎及根中所含成分主为巴马汀。尚含少量药根碱、黄藤素甲、黄藤素乙、内脂及甾醇。又谓在根茎、根及树皮中含小檗碱。
1． 掌叶防已碱（巴马汀，Palmatine）
本品系季铵生物碱，溶于水、乙醇，几乎不溶于氯仿、乙醚、苯等溶剂，掌叶防已碱盐酸盐即氯化巴马汀（palmation Chloride）C21H22O4N 2Cl23H2O为黄色针状结晶，熔点205℃（分解）。其理化性质与盐酸小檗碱类似。巴马汀氢碘酸盐（palmatine icdide）C21H22O4N2I22H2O为橙黄色针状结晶，熔点241℃（分解）。
2．药根碱（雅托碱2Jatrorrhizine）
本品系具酚羟基季铵盐，其理化性质与巴马汀类似，但较易溶于苛性碱液中，其盐酸在水中的溶解度亦比盐酸巴马汀为大，可籍此性质予以分离。药根碱盐酸盐（Jatrorrhizine Chloride）C20H20O4N2Cl2H2O为铜色针状结晶，溶点204~206℃，其苦味酸盐（Jatrorrizine picrate）C20H20O4N2C6H2O7N2为橙黄色柱状结晶，溶点217~220℃（分解）。
3．小檗碱（黄连素Berberine）
本品系季铵生物碱，其游离碱为黄色长针状结晶，C20H18O4N2OH25 H2O，溶点145℃，在100℃干燥，失去结晶水转为棕黄色。小檗碱能缓缓溶于水（1：20），乙醇（1：100），较易溶于热水、热乙醇、微溶于丙酮、氯仿、苯、几乎不溶于石油醚中，小檗碱与氯仿、丙酮、苯均能形成加成物。小檗碱盐酸盐（Berberine Chloride）C20H16O4N2Cl2H2O，熔点205℃（分解），微溶于冷水，较易溶于沸水，其硝酸盐及氢碘酸盐，极难溶于水（冷水约1：2000）。小檗碱的中性硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐在水中溶解度较大，小檗碱的盐类在水中的溶解度：
盐酸小檗碱 1：500
硫酸小檗碱 1：30（酸性盐1：100）
枸橼酸小檗碱 1：125
磷酸小檗碱 1：15
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