医学分子生物学复习思考题及答案(14)

2025-09-10

3’—GACGTC—5’

②平头末端(钝性末端) :在识别的碱基部位,对称地平齐切开DNA双链。如Sma Ⅰ

5‘—CCCGGG—3’

3’—GGGCCC—5’

3、什么是同尾酶?什么是同裂酶?

答:有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同,但切割DNA后,产生相同的粘性末端,这些酶彼此互称为同尾酶(isocaudarner)。所产生的相同的粘性末端称为配伍末端。

来源不同的限制性内切酶酶,但能识别和切割同一序列,这些酶称同裂酶或异源同工酶。

4、什么是基因载体?

答:基因载体:外援目的基因一般很难自由进入受体细胞内,即使能进入,也很难在受体细胞内进行复制和表达。为此,就要寻找一种特殊结构的DNA分子,它既能将外源目的基因带入受体细胞内,还能引导目的基因在受体细胞内进行复制和表达,称此特殊的DNA分子为基因载体,简称载体(vector)。根据载体功能不同又分为克隆载体(cloning vector)及表达载体(expression)。

5、什么是克隆载体?它具有哪些基本特点?

答:克隆载体是用来在宿主细胞中获得目的基

因的大量拷贝。

克隆载体应具备的基本特点

(1)具有复制起始点:它能使载体在宿主细胞内进行自主复制,同时能使带入的外源目的DNA片段进行同步复制扩增。

(2)含有可供筛选用的选择标志(selection marker)常称遗传标志,便于对阳性转化细胞进行筛选。重组DNA转化受体细胞时,并非每个细胞都转化成功,对转化成功的细胞进行筛选,就依赖这些选择标志。

(3)含有一个或多个限制性内切酶的单一酶切位点,便于目的基因插入。若载体中某一段特异核苷酸序列,含有多种限制性内切酶(RE)的单一酶切位点,称这段序列为多克隆位点(MCS,multiple cloning sites)。

6、什么是表达载体?什么是原核表达载体?它的基本特点是什么?

答:表达载体是用来在宿主细胞中表达外源目的基因。根据表达宿主细胞不同,又分为原核表达载体(prokaryotic expression vector)及真核表达载体(eukaryotic expression vector)。

原核表达载体是用于在原核细胞中表达外源目的基因。它是由克隆载体发展而来。除了具有克隆基因载体的一些特点而外,还需具有调控外源目的基因进行转录和翻译的一些调控序列、转录终止序列等。

7、什么是真核表达载体?它具有哪些特点?

答:真核表达载体

这类载体用于在真核细胞中表达外源目的基因,它也是由克隆载体发展而来,除了具有克隆载体的特点外,还应具有如下的特点:

① 它应具有真核表达的相应调控元件,包括增强子、启动子、转录终止信号、polyA 加尾信号等

② 具有真核细胞复制起始序列(富含AT序列)

③ 用于真核细胞阳性克隆筛选的筛选标志,常是药物抗性基因,如TryⅠ基


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