（1）新安装的或长期未使用的工作台，使用前必须用超净真空吸尘器或不产生纤维的物品认真进行清洁工作。长期不使用的工作台应拔下电源插头。
（2）使用前应提前20min同时开启紫外灯和风机组工作，工作20min后关闭紫外灯。要经常用75%乙醇将紫外灯表面和工作区的表面擦干净，保证其灭菌效率。
（3）工作台面上禁止存放不必要的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。 （4）禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免做明显扰动气流的动作。 （5）当需要调节风机风速时，用工作台操作面板上的轻触型开关进行调节（按电压分为五档：140V，150V，160V，180V，220V）。风机调节电压指示由红、绿双色光排显示。风速每递增一档，光排增加两格红色替代原来的绿色；反之，风速每递减一档，光排增加两格绿色替代原来的红色显示。
（6）禁止在预过滤器进风口部位放臵物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。
四、实训报告
1. 天平使用中应注意哪些事项？ 2．pH计使用中应注意哪些事项？
3．高压灭菌器使用中应注意哪些事项，如何确定冷空气已排出？ 4．超净工作台使用中，应注意哪些事项？
实验四 植物组织培养基母液的配制和保存
一、目的要求
学习植物组织培养基母液的配制，为培养基的配制做准备。 二、基本原理
植物培养基是植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节物质。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度按比例稀释。本实训以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。
三、试剂与主要用具
1．仪器、用具 分析天平(感量0.01g和0.0001g)、药匙、玻棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、200ml、500ml、1000ml）、试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液管、洗耳球、电炉等。
2．试剂
（1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 （2）MS培养基各成分试剂。
（3）植物生长调节剂：2，4-D、6-BA、IAA、NAA等。 （4）洗涤剂。 四、方法步骤
1．大量元素母液的配制 按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，按照表4-1中的次序分别准确称量后，分别用50ml 烧杯，加入蒸馏水30 ml溶解（可以加热至60℃～70℃，促其溶解）。溶解后，按顺序倒入一大烧杯中（烧杯中事先加入约50ml的蒸馏水，目的避免由于盐浓度过高使钙离子与磷酸根离子、硫酸根离子形成不溶于水的沉淀），注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用250mL容量瓶定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，保存于4℃冰箱中待用。
表4-1 MS培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量
培养基用量 母液 化合物名称 （mg/L） 大 KNO3 NH4NO3 量 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 素 1,900 1,650 370 10 元 170 440 425 1,100 倍数 (mg) 4,750 4,125 9,25 250 100 (mL) 母液量（mL） 扩大称取量母液体积1L培养基吸取
2. 微量元素母液的配制 按照培养基配方的用量，将微量元素各种化合物（除去铁盐）扩大100倍（表4-2），用万分之一天平分别准确称取，可以混合溶解，最后定容。将配制好的母液倒入试剂瓶中，贴好标签，于4℃保存。
表4-2 MS培养基微量元素母液（100倍）的配制剂量
培养基用量 母液 化合物名称 （mg/L） MnSO4·4H2O 微 ZnSO4·7H2O 量 H3BO3 KI 元 Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 100 22.3 扩大倍数 称取量 母液体积1L培养基吸取(mL) 母液量（mL） (mg) 223 86 62 8.3 2.5 10ml* 10ml** 100 10 素 *、**：因天平均存在误差，为减少误差带来的影响，建议称取2.5g，溶解并定容至100ml容量瓶中，然后移取10ml，加入混合液中。
3. 铁盐母液的配制 常用的铁盐是FeSO4·7H2O和Na2-EDTA的螯合物，必须单独配成母液。配制时，按照扩大后的用量（表4-3），分别称取FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，分别溶解后，将FeSO4溶液缓缓倒入Na2-EDTA溶液(需加热溶解)，搅拌均匀使其充分螯合，定容后贮放于棕色玻璃瓶中，并保存于冰箱中。
表4-3 MS培养基铁盐母液（100倍）的配制剂量
称取量 母液体积 扩大倍数 （mg/L） Na2-EDTA 铁盐 FeSO4·7H2O 27.8 37.3 100 278 (mg) 373 100 10 (mL) 母液量（mL） 培养基用量母液 化合物名称 1L培养基吸取
4．有机物母液的配制 按照表4-4 中各成分浓度扩大后的用量，用感量0.0001g天平分别称量各有机物。可以分别溶解定容，分别装入试剂瓶中，也可以混合溶解定容，装入同一试剂瓶中，写好标签，放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水，但叶酸（VBc）先用少量稀氨水或1mol/L NaOH溶液溶解；VH（生物素）先用1mol/L NaOH溶液溶解；VA、VD3、VB12应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容。
表4-4 MS培养基有机物母液（100倍）的配制剂量
培养基用量 母液 有机物名称 （mg/L） 有 甘氨酸 VB1 机 VB6 烟酸 物 肌醇 2.0 0.4 0.5 0.5 100 100 扩大倍数 称取量 母液体积1L培养基吸取(mL) 母液量（mL） (mg) 20 4 5 5 1,000 100 10 注：表中各成分的扩大倍数与称取量仅是举例，可以根据各实际需要，确定扩大倍数、计算实际称取量。
5．激素母液的配制 激素母液必须分别配制，浓度根据培养基配方的需要量灵活确定，一般是0.1～2mg/ml，根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分之一天平。配制激素母液时应注意，各激素的溶剂不同，具体见下表（4-5）。
表4-5 植物组织培养中常用植物激素及生长调节物质的溶剂
中文名 2，4-二氯苯氧乙酸
吲哚乙酸 吲哚丁酸 α-萘乙酸 6-苄基氨基腺嘌呤
腺嘌呤 激动素 玉米素 赤霉素 脱落酸
缩 写 2,4-D IAA IBA α-NAA 6-BA Ade KT ZT GA ABA
溶 剂 NaOH/乙醇 NaOH/乙醇 NaOH/乙醇 NaOH/乙醇 NaOH/ HCl
H2O HCl / NaOH NaOH 乙醇 NaOH
注：称取10mgNAA溶解后定容至100ml，即得到0.1mg/mlNAA贮备液。 称取100mg6-BA溶解后定容至100ml，即得到1mg/ml6-BA贮备液。 6．在配制母液时应注意：
（1）培养基各试剂应使用分析纯。
（2）在称量时应防止药品间的污染，药匙、称量纸不能混用，每种试剂使用一把药匙，多出的试剂原则上不能再倒回原试剂瓶。
（3）母液配制好后，贴上标签，写清母液名称、试剂浓度或扩大倍数、配制日期，并存放在4℃冰箱中。使用前，要进行检查，若发现试剂中有絮状沉淀、或长菌、或铁盐母液的颜色变为棕褐色，都不应再使用。
五、结果与分析
1．记录本小组配制的培养基母液种类、扩大倍数、母液配制体积、母液中各成分的称取量。
2．仔细观察在配制母液过程中的现象与遇到的问题，如是否产生浑浊或沉淀，并分析出现混浊的原因。
实验五 植物组织MS培养基的配制
一、目的要求
学习植物组织固体培养基的配制，学习高压灭菌器的使用，为外植体的接种与初代培养做准备。
二、基本原理
培养基是植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节物质。培养基中，固体培养基是最常用的一种培养基类型。
本实验以可用于长寿花、非洲紫罗兰、月季等植物初代培养的培养基MS+6-BA2 mg/L +NAA 0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.7%，pH5.8。配制1L为例，学习培养基的配制方法。
三、试剂与主要用具
1．仪器、用具 分析天平(感量0.01g和0.0001g)、高压灭菌器、药匙、玻棒、称量纸、滴管、洗瓶、标签纸、剪刀、烧杯（1000ml）、量杯、量筒、移液管、洗耳球、pH计、三角瓶（100 ml）、培养皿（直径9cm）、电炉、封口纸、棉绳、定性滤纸等。
2．试剂
（1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 （2）MS培养基各母液、蔗糖、琼脂。
（3）植物生长调节剂：6-BA（1 mg/ml）、NAA母液(0.1 mg/ml )等。
