《植物组织培养实验指导》
实验一 植物组织培养实验室的参观与设计 ..................................................................... 4 实验二 培养器皿的洗涤 ................................................................................................. 5 实验三 植物组织培养中常用设备和仪器的使用 .............................................................. 7 实验四 植物组织培养基母液的配制和保存 ....................................................................11 实验五 植物组织MS培养基的配制 ............................................................................... 15 实验六 培养基和培养用具的灭菌 ................................................................................. 18 实验七 外植体的选择与初代培养 ................................................................................. 20 实验八 植物离体培养物的形态观察 ............................................................................. 22 实验九 植物离体培养物的继代培养操作技术 ............................................................... 22 实验十 植物离体培养物的生根培养操作技术 ............................................................... 24 实验十一 试管苗的驯化、移栽和管理 .......................................................................... 25 实验十二 植物茎尖剥离与观察 .................................................................................... 27 实验十三 汁液涂抹法病毒检测 .................................................................................... 28 实验十四 植物离体根培养 ........................................................................................... 29 实验十五 花器官的剥离与观察 .................................................................................... 30 实验十六 花粉发育时期的鉴定 .................................................................................... 31 实验十七 花药培养 ...................................................................................................... 33 实验十八 小孢子培养（花粉培养） ............................................................................. 34
黄山学院生命与环境科学学院
林学教研室
2009.09
学生实验守则
一、 自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室内安静，注意环境卫生， 不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。
二、 实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。
三、 爱护实验仪器设备，厉行节约。仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。
四、 实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。若需借用应办理借物手续。
五、 注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。
六、 实验结束，由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备，学
生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。
组织培养实验室安全守则
实验室人员在工作的时候，要接触各种微生物、试样及检验过程中的物品，这些物质中有些对人体有毒害作用，有些还具有易燃易爆性质；同时，各种仪器、电器、机械等设备，在使用中也可能存在危险性。因此，作为实验室人员，必须遵守以下实验室安全守则。
（1）实验人员必须熟悉仪器、设备性能和使用方法，按规定要求进行操作； （2）组织培养室应保持室内通风良好，避免不必要的污染；
（3）在无菌室操作时，必须穿工作服、戴工作帽及口罩，使用前必须经紫外线照射或其他方法消毒，才可使用，操作必须严格无菌操作，以免污染；
（4） 在无菌室的超净工作台使用后，必须用酒精消毒手和台面，然后开紫外线照射20分钟；
（5）不使用无标签（或标志）容器盛放的试剂、试样；
（6）实验中产生的废液、废物应集中处理，不得任意排放；所用的培养物、被污染的玻璃器皿，都必须用消毒水泡过夜或煮沸或高压蒸汽灭菌等方法处理后再清洗；
（7）在实验室中使用手提高压灭菌锅时，必须熟悉操作过程，操作时不得离开，时刻注意压力表，不得超过额定范围，以免发生危险；
（8）严格遵守安全用电规程。不使用绝缘损坏或接地不良的电器设备，不准擅自拆修电器。
（9）实验完毕，实验人员必须洗手及消毒后方可进食，并不准把食物、食具带进实验室。实验室内禁止吸烟。
（10）实验室应配备消防器材。实验人员要熟悉其使用方法并掌握有关的灭火知识。
（11）实验结束，人员离室前要检查水、电、燃气和门窗，确保安全。
实验一 植物组织培养实验室的参观与设计
一、目的要求
通过认知实习，了解植物组织培养实验室的布局，掌握植物组织培养的程序，同时熟悉组织培养中涉及的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具
超净工作台、蒸馏水发生器或纯水发生器、高压灭菌器、普通冰箱、微波炉、煤气灶或电炉、显微镜、万分之一（或千分之一）电子天平、恒温箱、烘箱、各种培养器皿、分注器、各种实验器皿和各种器械用具。
三、方法步骤
1．集中学习组织培养实验室守则及有关注意事项。 2．由指导教师讲解植物组织培养的流程。
3．指导教师讲解组培实验室的构建情况，包括准备室、缓冲室、无菌操作室（又称接种室）和培养室的设计要求。
4．指导教师讲解仪器设备的名称、用途及使用方法。
5．指导教师讲解在实验室中培养材料的一些常用参数，如培养间的温度、光照时数、光照度等。
四、实训报告
1．植物组织培养实验室一般由几部分构成？各个部分的功能主要有哪些？ 2．植物组织培养常用的设备有哪些？
3．每人设计一个植物组织培养实验室的组建方案。
实验二 培养器皿的洗涤
一、目的要求
了解各种洗涤液的特性，掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器皿的洗涤技术。 二、基本原理
由于组织培养过程中器皿的重复利用，特别是培养基中有机物质及培养组织分泌物的附着，影响再次培养，导致实验结果发生误差，甚至使培养组织受到毒害。同时，一些新制玻璃器皿，都部分的存在碱性游离物，也影响到实验结果的准确性。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，使其达到不留任何残留物的要求。因不同培养器皿的材料、结构、使用方法不同，清洗的方法也不同。
三、试剂与主要用品
1．仪器用具 毛刷、塑料盆、天平、量筒、烧杯、洗耳球、洗刷装臵（全自动洗涤机）、高压灭菌器、耐酸手套、玻棒、需洗涤器皿等。
2．试剂 肥皂粉、洗衣粉、去污粉、洗洁精、重铬酸钾、浓硫酸、蒸馏水、纯乙醇或95%的乙醇等。
四、操作步骤
（一）玻璃器皿的洗涤（酸洗）
玻璃器皿的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
1．浸泡 新的或用过的玻璃器皿都需要先用清水浸泡，以软化和溶解附着物。新购臵
