作者：吴娇，梅文莉，王辉，戴好富，彭明
【摘要】 目的优化DM-5大孔吸附树脂分离纯化长春花中文多灵的洗脱条件。方法采用大孔吸附树脂色谱法，以不同体积分数乙醇水溶液进行洗脱以分离富集文多灵，并进行高效液相色谱(HPLC)跟踪检测。结果 长春花中文多灵主要富集在70%乙醇洗脱液中，自海南文昌引种的长春花中文多灵含量为0.19%，明显高于自海南三亚引种的长春花中文多灵的含量0.03%。结论 DM-5大孔吸附树脂对长春花中文多灵的分离纯化效果良好，此方法操作简单、重复性好，具有较好的工业化前景。
【关键词】 长春花; 文多灵; 大孔吸附树脂
长春花Catharanthus roseus (L.) G. Don是一种广布于热带地区的抗癌药物的资源植物，在海南分布于万宁、文昌、陵水、三亚、东方等地。全草药用，可用于治疗白血病、单核细胞性白血病、横纹肌软骨病、肺癌、胃癌、子宫癌、淋巴肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌、火烫伤、高血压病、高血糖等症[1，2]。迄今为止，已经从该植物中分离出一百五十余种生物碱， 可分为单吲哚生物碱，如具有重要用途的文多灵(vindoline);二聚吲哚生物碱长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)等[2]。文多灵又称文朵灵、文多林、文朵灵碱、长春花朵宁和长春刀灵，是合成长春碱和长春新碱的前体[3]。目前长春碱和长春新碱是非常有价值的肿瘤化疗药物[4]。此外，动物实验表明，文多灵具有降血糖、利尿和降血脂作用，还对某些病原菌有抑制作用[5]。
随着对文多灵药用功能研究的不断深入，其用途也越来越被广泛揭示，市场需求日益增加，目前长春花已在海南大面积种植。近年来各国学者采用多种方法对长春花中生物碱进行分析和分离，发现国内长春花系列品种中海南产长春花中文多灵的含量最高[6]，而且海南不同地区长春花品种叶中文多灵的含量不同[7]。同时已有较多研究表明大孔吸附树脂对于生物碱具有良好的吸附效能。最近，张琳等[8]利用大孔树脂吸附分离长春花中的文多灵、长春质碱和长春碱，效果明显强于传统的硅胶和氧化铝载体。本研究采用DM-5大孔吸附树脂富集自海南文昌、三亚引种到海口的长春花中的文多灵，并利用HPLC检测文多灵的含量，优化其洗脱条件，为深入开发利用海南产长春花中的文多灵提供科学依据。
1 材料与仪器
1.1 材料与试剂2007-03在海南海口中国热带农业科学院热带生物技术研究所生物检测中心基地采集长春花植株地上部位，采集的两个品种分别是从海南三亚和文昌引种到海口的长春花，编号分别为cch-a2070315和cch-b2070315，经中国热带农业科学院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定，标本保存在本研究室。DM-5大孔吸附树脂(南开化工厂);文多灵标准品(海南国栋公司);甲醇(色谱纯 美国Burdick & Jackson)、甲醇(分析纯)、乙腈(色谱纯 美国Burdick&Jackson)、三乙胺(色谱纯 美国Burdick & Jackson)、磷酸(分析纯)、去离子水(实验室自制)。
1.2 仪器层析柱、精密pH计(梅特勒)、烘干箱(PHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司)、电子天平(Sartorius BP221S)、超声波发生器(德国EHMA T820/H)、真空旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI Vacuum controuer V-800)、DIONEX 高效液相色谱仪(UVD170U，P680 HPLC Pump)。
2 方法
2.1 树脂的预处理称量DM-5树脂2 kg，加乙醇(浓度>95%)浸泡24 h，用2BV乙醇，以1.5 BV/h的流速正向通过树脂层，并保持液面高度，最后保留一定量的乙醇，浸泡12 h，然后用2 BV～4 BV水，以1.5 BV/h的流速正向通过树脂层，洗至流出液加水不呈白色混浊为止。再用2 BV的1 mol/L HCl溶液，以2 BV/h的流速正向通过树脂层，并浸泡2 h～4 h，而后用纯水以同样流速洗至出水pH中性;加入2 BV～3 BV 1 mol/L NaOH溶液以2.0 BV/h的流速正向通过树脂层，而后用纯水以同样流速洗至出水pH中性。取适量装入玻璃色谱柱 (40 cm×2.4 cm)。
