siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用(3)

　　2.3细胞转染 siRNA 后各组 VEGF mRNA 表达水平 电泳结果显示，空白对照组、脂质体组、错义序列组421 bp处均见清晰条带，siRNA各组条带均明显减弱（见图1），各组内参照GAPDH条带一致。空白对照组、脂质体组、siRNASCR组、siRNA1 组、siRNA2 组 AVEGF/ AGAPDH比值分别为 0.856± 0.009 、 0.834±0.020 、 0.815±0.017 、 0.456± 0.030 、 0.468± 0.019，siRNA1 、siRNA2 与空白对照组、脂质体组、错义序列组比较，差异均有极显著意义（ F= 244.945 ，q=27.427～30.560，P < 0.01 ），其他各组比较差异无显著性。 　　2.4siRNA转染后24 h各组VEGF蛋白分泌量的变化 siRNA1 和siRNA2 组的VEGF蛋白分泌量明显低于其他3组，差异均有显著性（ F=33.131，q= 9.036～ 12.154，P <0.01）。见表4。
　　表2 转染siRNA各组SGC-7901细胞24 h抑制率（略）
　　表3 流式细胞仪检测细胞周期变化（略）
　　图1 转染siRNA后SGC-7901细胞VEGF mRNA表达水平（略）
　　① DNA Marker;② siRNA1 ;③ siRNA2 ;④ 脂质体组
 
　　表4 各组SGC-7901细胞上清VEGF蛋白分泌量的比较（略）
　　3 讨论 
　　胃腺癌是人类常见的癌症之一，严重威胁人类的健康和生命，发病率呈逐年上升的趋势。手术治疗可以使其中一部分病人得到治愈，但更多的病人面临错失手术时机以及术后肿瘤复发的局面。在分子生物学迅速发展的今天，寻找一条有效的胃腺癌基因水平的治疗方法具有重要的临床价值。 微血管的生成与肿瘤的生长、发展与转移密不可分，抑制血管生成已成为近年来抗肿瘤治疗研究的重要课题和热点问题。肿瘤血管的形成受多种因子调节，其中最重要的一种是VEGF，它不仅促进血管生成，还增加血管通透性，促进转移，改变宿主免疫功能。VEGF基因位于染色体的6p21.3，全长 28 kb ，编码VEGF的基因长约14 kb，由8个外显子和7个内含子交替构成。其 mRNA的不同剪接可以产生5种异构体，即VEGF121、145、165、189及206［9］。其中VEGF165是最为常见的形式，在包括胃腺癌在内的多种肿瘤中有表达［10，11］，在肿瘤微血管生成过程中扮演重要角色。通过抑制VEGF的表达抑制肿瘤微血管形成是当前抗肿瘤研究的热点之一。RNAi作为生命科学领域的新技术，其应用非常广泛，从单细胞生物一直到人，作为基因表达干预的理想方法，可应用于病毒和肿瘤的基因治疗［12，13］。本研究以人胃腺癌细胞系SGC-7901为对象，利用分子生物学技术设计、体外转录针对VEGF基因的两组siRNA，转染体外培养的SGC-7901细胞，遏制VEGF基因的表达，研究胃腺癌的防治方法。结果表明，siRNA对VEGF基因从 mRNA转录到蛋白质表达均具有明显的抑制效果，抑制了胃腺癌细胞SGC-7901的增殖，促进细胞凋亡，改变细胞周期，降低VEGF mRNA表达水平及蛋白表达水平。由此可见，在胃腺癌的抗血管生成基因治疗中，VEGF可以成为有效的靶位点。 
　　本文实验所用体外转录试剂盒所转录出来的 siRNA纯度高 ，可直接应用于体外培养细胞的转染。脂质体带正电，可以靠静电作用结合RNA形成RNA-阳离子脂质体复合物，同时又吸附在带负电的细胞膜表面。因此，脂质体转染法在短期应用的基因治疗中具有明显优点。总之，本文为RNAi应用于肿瘤的基因治疗提供了一些实验基础，验证了应用RNA干扰技术可以有效抑制肿瘤相关基因的表达，从而抑制瘤细胞的增殖、防治肿瘤的基因治疗思路，为下一步动物实验奠定了基础。当然，针对VEGF的RNAi技术临床应用于胃腺癌治疗尚需要进一步的细胞实验以及动物实验。 
　　［参考文献］
　　［1］ FIRE A. RNA-triggered gene silencing［J］. TIG， 1999，15（9）:358-363. 
　　［2］ FIRE A. Potent and genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans ［J］. Nature， 1998，391:806-811.