siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用

【关键词】  RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达
　　［摘要］目的 研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子（VEGF）基因表达的影响。方法利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段，转录针对VEGF mRNA的siRNA，通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC-7901细胞，设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照，用MTT法检测细胞抑制率，流式细胞仪检测细胞周期的改变，RT-PCR检测转染后VEGF mRNA表达水平的变化，ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果 所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长，并使细胞周期阻滞于G0 /G1 期;VEGF mRNA的表达也受到有效抑制，明显减少;同时，对应的VEGF蛋白水平也显著降低，作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论 体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。
　　［关键词］ RNA干扰;胃肿瘤;血管内皮生长因子类;基因表达
　　［ABSTRACT］ObjectiveTo evaluate the gene expression of VEGF by RNA interference in human gastric cancer. Methods siRNAs targeting VEGF mRNA was obtained by in vitro transcription， which was transfected into human gastric cancer cell lines SGC-7901 with Lipofectamine 2000. The non-transfected cells， cells treated with Lipofectimine and cells treated with SCR were taken as controls. MTT was used to detect the inhibitive rate of cell growth. Flow cytometry was used to detect the changes of cyc-ling of the cell. The inhibitive effect of siRNA on mRNA level was detected by RT-PCR， the secretion of VEGF protein in the su-pernatant by ELISA. ResultsThe small interfering RNA （siRNA） targeting human VEGF effectively inhibited the proliferation of gastric cancer SGC-7901. It affected the distribution of cell cycle， increased cell population in G0 /G1phase and decreased it in S phase. The expression of VEGF mRNA was significantly inhibited in SGC-7901;otherwise，VEGF protein notably decreased， but the effects did not appear in control scramble siRNA. ConclusionThe level of VEGF gene expression of SGC-7901 cells can be declined by transfected with siRNA. 
　　［KEY WORDS］RNA interference; gastric neoplasms; vascular endothelial growth factor; gene expression
　　肿瘤血管的形成受多种因子的调节，其中血管内皮生长因子（VEGF）是作用最强、特异性最高的一种能刺激细胞运动和肿瘤血管生成的因子，与肿瘤的发生、发展关系密切。将外源性或内源性双链RNA（dsRNA）导入细胞后引起与该段RNA同源的 mRNA产生特异性降解，其相应的基因受到抑制，这种发生在转录后的基因静寂现象被称为RNA干扰（RNAi）［1～3］。体内外实验证实，21～23 bp的siRNA（small interference RNA）可特异性地发挥RNAi作用［4］。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤， 其病死率居各种恶性肿瘤之首［5～7］。探索治疗胃腺癌的新方法具有重要临床价值。本实验以VEGF基因为靶标，设计合成siRNA，通过脂质体转染的方法将其转入胃腺癌细胞株SGC-7901，研究其静寂VEGF基因表达的效应，为临床进一步应用提供理论依据。现将结果报告如下。
　　1 材料和方法
　　1.1 材料及其来源 SGC-7901细胞购自中国协和基础学院细胞中心。DMEM培养基、LipofectamineTM2000、TRIzol Reagent、RPMI 1640购自Invitrogen公司。T7 Ri-boMAXTMExpress RNAi System试剂盒、Access RT-PCR Introductory System购自Promega公司。 四唑氮蓝（MTT）购自Sigma公司。人VEGF ELISA　Kit购自武汉博士德生物工程有限公司。