婴儿肝炎综合征的病毒病因学分析(2)

2025-04-28

　　1.2 方法
　　1.2.1 肝功能及肝炎病毒检测抽取病儿入院当天空腹静脉血2 mL，分离血清用于肝功能检测，指标包括ALT、AST、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总蛋白、清蛋白、球蛋白以及总胆汁酸等，用Dade Behring 公司生产的自动生化分析仪检测。肝炎全套包括抗HAV抗体、抗HCV抗体以及乙型肝炎五项，应用试剂盒进行检测。抗HAV抗体检测试剂盒购自英科新创科技有限公司，抗HCV抗体检测试剂盒购自上海科华生物技术有限公司，乙型肝炎五项检测试剂盒购自艾康生物技术有限公司。
　　1.2.2 病毒特异性IgM抗体的检测采集受检者外周血，分离血清，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱疹病毒（HSV）以及EB病毒衣壳抗原（VCA）特异性IgM 抗体，诊断试剂盒购自德国NOVATEC公司。HSV抗体检测试剂盒不分型别，具体操作参照试剂盒说明进行，对阳性标本进行重复实验。
　　1.2.3 HCMV DNA检测收集晨尿标本，采用HCMV PCR荧光检测试剂盒(深圳市匹基生物工程股份有限公司)检测，严格按照操作说明书进行。结果判定以低于最低检出限为阴性。
　　1.2.4 EBV DNA检测采用PCR方法。采集受检者外周血EDTA抗凝，分离外周血单个核细胞（PMBC），酚氯仿异戊醇法常规提取细胞DNA。咽分泌物标本DNA的提取参照文献[3]进行。参照文献[4]选用扩增EBV BamHⅠW 区特异性引物和探针对提取的细胞DNA 进行检测，其上游引物序列为： 5′CCAGACAGCAGCCAATTGTC3′，下游引物序列为： 5′GGTAGAAGACCCCCTCTTAC3′，扩增产物为129 bp；其探针序列为：5′CCCTGGTATAAAGTGGTCCTGCAGCTATTTCTGGTCGCATC3′。PCR反应总体积为25 μL，反应体系包括：10×Buffer 2.5 μL，MgCl2 1.5 mmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，上下游引物各0.5 μmol/L，Taq DNA 聚合酶1.0 U，DNA 模板3 μL。同时设立阳性对照和阴性对照，阳性对照为EBV 阳性的B958细胞，阴性对照为EBV 阴性细胞系Ramos 细胞。扩增条件为：94 ℃预变性5 min ；然后94 ℃ 30 s，55 ℃30 s，72 ℃ 45 s，扩增35个循环；最后72 ℃延伸5 min。取扩增产物10 μL 以20 g/L 琼脂糖凝胶电泳后转印到尼龙膜上，与地高辛标记的寡核苷酸探针进行杂交反应，经碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体作用后，加酶的发光底物CSPD作用5 min，自显影检测杂交信号。
　　1.3 统计学分析

　　数据间比较采用四格表χ2检验和四格表精确检验法，数据处理由SPSS 11.6统计软件完成。
　　2 结果
　　2.1 肝炎病毒检测    乙型肝炎五项检测47例IHS病儿仅有1例HBsAg阳性，1例HBsAg和HBeAg均阳性，占4.3%；HAVIgM和HCVIgM检测均为阴性。
　　2.2 特异性IgM抗体检测

　　实验组HCMVIgM阳性21例，VCAIgM阳性7例，而HSVIgM为阴性；对照组HCMVIgM、HSVIgM、VCAIgM均为阴性，两组HCMVIgM、VCAIgM比较，差异有显著意义(χ2=23.56、4.62，P<0.01)。
　　2.3 PCR 检测

　　实验组尿HCMV DNA、外周血单个核细胞EBV DNA、咽分泌物EBV DNA阳性率均高于对照组，差异有显著性(χ2=4.36～43.08，P<0.05、0.01)；实验组病儿HCMV和EBV合并感染4例。见表1。
　　表1 两组PCR检测结果比较（略）
　　2.4 主要临床表现及并发症

　　IHS病儿的临床表现多样，主要有黄疸、肝功能损害（以血清ALT升高为主，少数伴有AST升高），半数以上的病儿有肝脾大。不同病毒感染导致的IHS临床表现大致相同。IHS病儿由于肝功能损害严重导致机体免疫功能低下，黄疸持续存在，病程迁延，常发生呼吸、消化、泌尿和神经等系统的相应的并发症，最常见的并发症是肺炎，其次为腹泻、贫血和营养不良。47例病儿中并发肺炎15例，腹泻3例，贫血3例，营养不良2例，先天性梅毒1例，先天性心脏病1例，血小板减少性紫癜1例。

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