临床生化标准操作程序文件(SOP)[1](3)

2025-04-28

析物稳定性和测定结果准确性的重要参数。(1)于22 oC~25oC血清或血浆的保存不超过8h;(2)实验于8h内不能完成时,血清或血浆应置2o C~8oC保存;(3)48h内不能完成的实验项目,或分离的血清或血浆需贮存48h以上时,应于-20o C保存; (4)标本不可反复冻融(只能冻融一次), 且不可贮存于无霜冰箱(可造成样品温度变化);(5)离心后分离凝胶(凝胶屏障)上面的血清可保存2~5天,但必须保证凝胶的完整性;但应用非凝胶分离物质时,离心后必须立即将血清或血浆移出。(6)血清或血浆必须保存于密闭的试管中 。 四、血清或血浆分离物质

是指将血清或血浆从全血中分离出来的物质,包括凝胶物质与非凝胶物质。 (一)凝胶物质

为一类具有特定粘度和特殊比重(介于血清或血浆与凝块之间的比重)的惰性凝胶物质,用(1000~1100)×g RCF离心10 min, 能在血清或血浆与凝块之间形成不可穿透的凝胶屏障,从而将血清或血浆与其接触的血细胞、凝块分开。 (二)非凝胶物质

是由惰性物质(玻璃、塑料、纤维、毛毡等)构成的小珠、盘、滤器、纤维塞等组成。具有介于血清或血浆与凝块之间的比重,将其轻轻 加入血管中,用(1000~ 1100)× g RCF 离心10 min时, 可透过血液移动至血清或血浆与血细胞、凝块之间,形成一个界面,使血清或血浆被分离出来。 (三)完整的凝胶管系统

该系统是由一个真空采血管(硅化塑料管)、内含惰性凝胶物质、促凝剂或抗凝剂组成。使用时要注意该产品必须具有相应性能证书和有 效期,并且必须在其有效期内正确使用。 随着检验方法日益完善,高精档次的自动化仪器的大量应用,以及检验的科学管理和检验工作人员技术水平不断提高,明显 降低检测过程中的影响因素和干扰,而分析检测前的各类影响或干扰因素相对增多。现代检验医学对检测标本的留取与收集提出较高的要 求,而广大就诊患者也必需了解留取标本的基本知识,遵照嘱托,配合检验人员,以使检验结果更准确准确可靠。

门诊检验常见的标本一般包括血液(指血,静脉血)、尿、粪便、脑脊液、胸水、腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等,这些标本收集 的时间、方法和保存都有一定的要求。 标本采集注意事项 一、血液标本

尽量避免生理因素的影响,有些生理因素,如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化,有些甚至还 有昼夜变化。采集血液标本的条件应尽量 一致为宜,如无法避免,应说明在标本上注明该因素。 1.外周血

一般选取左手无名指内侧采血,该部位应无冻疮,炎症,水肿,破损。如该部位不符合要求,以其他手指部位代替。对烧伤病人,可选择 皮肤完整处采血。由于部分血液常规检测(如白细胞计数、分类等)受生理因素影响波动过大,比较时宜便条件尽量一致。出、凝血功能 的检测项目(如血小板计数,出血时间或凝血时间等)的检测,不宜服用抗凝、促凝药物,以免影响测定结果。 2.静脉血

除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外,目前绝大多 数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。在血清检测项目中,有些(如 血糖,血脂等)受饮食及昼夜因素影响较大,一般以清晨空腹血标本为宜,有些在血中衰变较快(血清酶活性测定如ACP活性等),0 ~4℃贮存活性减弱也不一,这些项目的检测必须及时而快速,有些(如肌酸激酶等)受运动等因素影响较大。抽血时避免溶血的发生也 十分重要,尤其涉及血钾,

LDH等的测定。切忌在输液的同侧静脉抽血做各项检验。 二、尿液标本

同血标本一样,尿液标本受饮食、运动、药物量等因素的影响也较大,特别是饮食的影响,故一般来说晨尿优于随机尿。晨尿是指清晨起 床后的第一次尿标本,较浓缩和酸化,有形成分(如血细胞,上皮细胞,管形)相对集中便于观察。随机尿即随意一次尿,留取方便,但 受饮食、运动、药物影响较甚,易于出现假阳性和假阴性结果,如饮食性蛋白尿,饮食性糖尿,维生素C干扰潜血结果等。餐后尿(午餐 后2小时收集的患者尿液)适用于尿糖,尿蛋白和尿胆原的检查,此时的尿标本可增加试验敏感性,检出较轻微的病变。12小时尿细胞 计数,即Addis (前晚8时排空膀胱后留取至次日8时的所有尿液),因时间较长,细菌易繁殖,须加入防腐剂甲醛。

24小时尿(第一天晨8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液)中化学物质的定量,包括蛋白,糖,Ca2十等,检测不同的物质 ,选择不同的防腐剂防腐。清洁中段尿多用于尿细菌培养,要求无菌,冲洗外明后留取标本。所有尿标本的收集都应足量,最少12m1 ,最好50ml,定时尿须全部收集,对女性患者应避免阴道分泌物、经血污染尿标本。 三、粪便标本

粪便标本的检测对判断消化系统疾病有重要参考价值。采集时要求用干净的件签选取含有粘液、脓血等异常病变成分的粪便 ,对外观无异常的粪便须从表面、深处及粪端多处取材。找寄生虫虫体及作虫卵计数应收集24小时粪便。查痢疾阿米巴滋养体应于排便 后立即检查,从有脓血和稀软处取材,保温送检。

查日本血吸虫虫卵时应取粘液、脓血部分,孵化毛蚴时至少留取30g粪便,且需尽快处理。检查蛲虫卵须用透明薄膜拭子于晚12时或 清晨排便前自肛门周围皱处处拭取并立即镜检。隐血试验(化学法),试验前3日禁食肉类及含动物血食物并禁服铁剂,维生素C等。所 有粪便标本采集后1小时内应检查完毕,以防止有形成分受消化酶及pH的破坏。 四、脑脊液标本

脑脊液标本采集后立即送检,放置过久将影响检验结果:如细胞变性,破坏,导致计数和分类不被:有些化学物质如葡萄糖等将分解含量 减少:细菌发生自溶影响细菌的检出率。脑脊液抽取后一般分装三个无菌管,第一管作细菌培养,第二管作化学分析和免疫学检查,第三 管作一般性状及显微镜检查,三管顺序不宜颠倒。因标本采集较难,全部送检和检测过程应注意安全。 五、胸腹水标本

与脑脊液标本一样,采集后的标本注意安全,及时送检。一般也分装三管,一管作常规细胞学检查,一管生化检查,一管细菌培养,顺序 以与脑脊液相同为宜。 六、前列腺液标本

前列腺液标本由前列腺按摩后采集,液量少时直接滴在载玻片上及时送检,须注意防止标本蒸干,量多时收集在洁净干燥的 试管中。若按摩不出前列腺液,可检查按摩后的尿液沉渣。

七、阴道分秘物标本

阴道标本采集前24小时应禁止房事、盆浴、明道检查、明道灌洗及局部上药等.取材所用器械需要清洁。一般用盐水浸湿棉拭子自阴道 或阴道弯后部、宫颈管口取材,制生理盐水涂片后观察分泌物标本,经期的女性患者不宜检查阴道分泌物标本。

天冬氨酸氨基转移酶(速率法)

标准化操作程序文件

单位:大同滨河肝胆病医院 科室: 检验科生化室 文件编号: 版本: 批准施日期: 有校期: 一年

复审计划:每年复审,测定系统变化时需进行修订 发放部门:检验科生化室 编写者: 审批者: 保管者: 修订者:

天冬氨酸氨基转移酶(速率法) 1 概述

AST广泛分布于人体,在心,肝,骨骼肌,肾和红细胞内有较高的浓度,这些组织的损伤或疾病,如心肌梗死,病毒性肝炎,肝坏死,肝硬化,和肌营养不良等症均会引起血清或血浆AST水平的升高。 2 样本收集

新鲜无溶血标本,血清或血浆样本均不溶血。血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。样本在4摄氏度可稳定7天。采血前病人应禁食12小时,采集静脉3ml,待凝固后(最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟)通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。3000r/min离心5-10分钟,分离出血清备用。不建议采用血浆标本。 3 方法原理

L-天冬氨酸+a-酮戊二酸------------草酰乙酸+L-古氨酸 草酰乙酸+NADH+H+-----------L-苹果酸+NAD+ 4剂来源,配置及储存 试剂来源:迪瑞

试剂配置:试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使用。启用后在2-8度可稳定30天。若试剂混浊,或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.1A,应予丢弃。

试剂储存:试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。 5分析仪器

CS-600B全自动生化分析仪

分析参数:样品量15 u/l 试剂量:第一试剂240 u/l(R1);第二试剂60 u/l 测光点23—38 测定模式:速率法 负反应 分析波长:340nm/405nm(主波长/副波长)

6计算方法

样本浓度(U/L)=样本管吸光度的变化×校准液浓度(U/L)

校正管吸光度的变化

7线性范围 3----1000U/L 8 参考范围:0—40u/

新生儿和婴儿的AST大约是成人的二倍,六个月以后降至成人水平。 9 失控控理

1:立即重测同一质控品,如重测后结果仍不再允许范围,请进行下一步。 2:新开一瓶质控品,重测失控项目,如新开的质控血清结果正常,那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质,如结果仍不再允许范围,则进行下一步。

3:进行仪器维护,重测失控项目。检查仪器状态,查明光源是否更换,比色杯是否需要清洗或更换?对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂,此时可更换试剂已查明原因。如果结果仍不再允许范围内,则进行下一步。

4:重新校准。重测失控项目。用新的校准液校准仪器,排除校准液的原因。 5:请专家帮助。如果前五步都为能得到在控结果,那可能是仪器或试剂已查明

原因,只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援。 10 注意事项

1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改变。

2:如测试结果超出线性范围,样本应稀释后测试,调整因子数或将结果乘以稀释倍数。

3:结果的准确性仪器校正和测定温度,时间的控制。

4:高血脂或黄疸样本在340nm处有较高的吸光度值。这类样本的高值AST耗尽底物后,在340nm处仍维持较高的吸光度值,此时样本应稀释后在进行测定。 5:NADH在334nm和365nm处的毫摩尔消光系数分别为6.18和3.4.

6:若试剂混浊,或以水为空白在340nm处吸光度值低于1.1时,则不能使用。 7:由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断 8:样本与废液等有潜在生物传染性危险,操作者颖遵守实验室安全操作规定并按当地医疗废弃物,感染性废弃物,产业废弃物等规定处理废液。

11:临床意义

AST在心肌细胞内含量较多,当心肌梗死时,血清中AST活力增高,在发病后6-12小时之内显著升高,在48小时达到高峰,约在3-5天恢复正常。血清中AST也可来源于肝细胞,各种肝病可引起血清AST升高,有时可达1200单位,中毒性肝炎还可更高。肌炎,胸膜炎,肾炎及肺炎等也可引起血清AST升高。临床上还可通过计算AST/ALT对肝病进行诊断和鉴别诊断


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