人类不同年龄段腰椎间盘组织细胞凋亡及其调控蛋白Bcl2和Bax的表(2)

2025-04-27

1 资料和方法
    1.1 实验分组
    取0～58岁新鲜健康椎间盘L4或L5（尸体，死亡后1～4 h）20例，分为0～10 岁、20～30岁、31～40岁、41～50岁和50岁以上5个实验组，每组4例，无性别限制。
    1.2 取材及处理
    取出的椎间盘组织冲洗后立即放入40 g/L多聚甲醛溶液固定3周，常规石蜡包埋。切片时，每4张连续切片为一组，切片厚度7 μm，分别行HE、TUNEL和Bcl2、Bax蛋白免疫组织化学染色。
    1.3 观察方法
    使用OLYMPAS BX50多功能显微镜观察组织，然后把镜下的图像用摄像机接转至彩色监视器屏幕上，计数细胞数。当细胞剖面压在边线时，只计算压上边线和左边线者，压下边线和右边线者不计入。每组选取4张切片，每张切片在高倍镜下随机选取5个视野，计数单位面积内髓核细胞的数量，结果用±s表示，将所得数据进行单因素方差分析。运用显微图像分析系统（VIDAS）测定椎间盘髓核细胞内免疫反应产物的平均吸光度值。在每张切片上随机选出5个视野进行计算机显微图像分析，测得其平均吸光度值，结果用±s表示，并对所得数据进行单因素方差分析。
    2 结    果
    2.1 HE染色观察
    在婴幼儿及儿童时期，髓核细胞数量较多，以长椭圆形或梭形脊索细胞为主，可见少量纤维样细胞。随着年龄的增长，脊索细胞逐渐减少，并开始出现软骨样细胞。至成年后，脊索细胞几乎完全消失，在髓核中以软骨样细胞为主，脊索样细胞偶见。此后，伴随着年龄的增长，软骨样细胞的数量呈进行性减少，50岁以后髓核内细胞数量已经很少(H=95.123，q=7.651～10.243,P<0.05)。见表1。

   2.2 TUNEL检测
    在婴幼儿及儿童时期椎间盘髓核细胞的数量较多，TUNEL检测阳性细胞的百分率较高，阳性颗粒的平均吸光度值亦很高。至成年以后，髓核组织TUNEL阳性细胞的百分率及阳性颗粒的平均吸光度值较儿童时期有所降低。此后，随年龄增长髓核细胞的数量持续下降，而TUNEL检测阳性细胞的百分率和阳性颗粒的平均吸光度值又逐渐增高。见表1。与相邻前一组比较，无论是TUNEL检测阳性细胞的百分率还是阳性颗粒的平均吸光度值，差异均有显著性（F=126.415、205.391，q=6.617～10.448，P<0.05)。表1 人类不同年龄段腰椎间盘髓核细胞HE染色细胞数、TUNEL检测阳性细胞百分率及平均吸光度值
    2.3 Bcl2免疫组织化学染色
    从胚胎时期开始，随着年龄的增长Bcl2蛋白免疫阳性细胞的百分率基本上呈持续降低的趋势；阳性颗粒的平均吸光度值随年龄的增长呈现同样的变化趋势(F=81.385、320.176，q=1.471～22.805，P<0.05)。见表2。
    2.4 Bax免疫组织化学染色
    在婴幼儿及儿童时期，Bax免疫阳性细胞百分率和阳性颗粒的平均吸光度值均较高，然后随年龄的增长Bax免疫阳性细胞百分率和阳性颗粒的平均吸光度值开始下降；到成年后二者又开始逐年增高(F=102.134、318.609，q=4.727～46.139，P<0.05)。见表2。表2 人类不同年龄段腰椎间盘髓核细胞Bcl2、Bax免疫组化染色阳性细胞率及平均吸光度值
   3 讨    论
    目前，人们对椎间盘组织发生退变的详细机制尚不十分明了。自细胞凋亡的概念提出以来，众多学者对其进行了深入的研究，并猜测细胞凋亡可能参与了椎间盘组织退变的发生。根据本实验结果，自胚胎后期开始就有大量髓核细胞的胞核表现为TUNEL反应阳性，随着年龄增长TUNEL阳性反应的细胞数逐渐减少，阳性反应越来越强，但细胞凋亡率却呈现如下趋势：自胚胎后期开始，细胞凋亡率处于较高水平，并随年龄增长而逐渐降低，到成年时降到最低水平；此后，随年龄增长细胞凋亡率缓慢增高，但凋亡率不能达到胚胎后期及婴幼儿的水平。这一时程基本与光镜下HE染色所显示的髓核细胞死亡的时程相似，提示椎间盘髓核细胞的死亡是以凋亡的形式进行的，这与GRUBER等[3]的研究结果相一致。随着时间推移，大量髓核细胞以凋亡的形式死亡，细胞活性降低，分泌功能低下，导致髓核的结构和组成成分发生改变，椎间盘组织发生退变。

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