另外，精密称取人参药材粉末2 g，共3份，分装于滤纸筒内，置于索氏提取器内，加氯仿150 ml，回流提取3 h，取出纸筒，挥发除去氯仿，药渣连同纸筒一起放入100 ml锥形瓶中，加50 ml用水饱和的正丁醇，放置过夜，称重， 超声处理30 min，冷至室温，称重，用水饱和的正丁醇补充减失重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，置于蒸发皿中，在水浴上蒸发除去正丁醇，残留物用甲醇溶解，转移到10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为人参药材供试溶液。再精密称取三七药材粉末0.8 g，共3份。同法处理，制备成三七药材供试溶液。分别精密量取人参、三七药材供试溶液10 μl, 注入高效液相色谱仪，按照“2.3.1”项下的条件，测量3种皂苷的峰面积。按“2.3.3”项下的回归方程计算3种皂苷及它们之和的平均质量分数。按照处方比例计算，人参和三七混合药材中三七皂苷R1的质量分数为0.45%，人参皂苷Rg1和Rb1分别为2.65%和1.94%，3种皂苷之和为5.04%(见表5)。超声提取法被认为是提取率最高的一种方法[10]。本试验用10倍于药材量的70%乙醇提取3次，每次2 h。提取物中3种皂苷的质量分数之和为5.17%(见表4)，略高于超声提取法的皂苷含量，可认为人参和三七的皂苷成分基本提取完全。
表4 提取工艺的验证结果 表5 人参、三七药材中皂苷含量
3 讨论
本研究选用乙醇回流提取法，用正交实验优选提取工艺，以10倍于药材量的70%乙醇水溶液回流提取3次，每次2 h。标志性皂苷成分三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和Rb1的质量分数为药材的5.17%，为总皂苷的99.36%，人参和三七的皂苷成分基本提取完全。所选工艺条件已应用于工业放大生产试验，效果良好。
在验证实验中增加了第4次用水提取1 h。用水作溶剂，有利于丙二酰基类皂苷的提取(人参皂苷Rb1，Rb1，Rb1，Re等)[11]。但是，水溶性杂质增多，提取液难以过滤，浓缩费时。要不要用水提取第4次，取决于制剂工艺的需要：如果提取规模小，或者需要控制水溶性杂质和出膏率，无需用水提取第4次;如果大规模生产，人参和三七用量大，可以用水提取第4次，提取液浓缩后，调成弱碱性，使丙二酰基类皂苷脱去酰基，变成相应的人参皂苷，再用乙醇溶出皂苷，沉淀除去杂质，以便充分利用人参和三七贵重药材。
目前，已从人参中分离鉴定了46种单体人参皂苷[12]，三七含有总皂苷类成分，且大部分皂苷与人参皂苷类成分相同[13]。提取含人参和三七的中药复方药材，其评价指标常用标志性成分人参皂苷。当然，使用的人参皂苷和三七皂苷作为对照品的种类越多，分析结果的代表性会越强，分析成本也越高。本研究选用三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和Rb1 为对照品，采用高效液相色谱法测定提取物中3种皂苷的含量，以3种皂苷含量的和作为评价指标，筛选正交实验的最佳工艺条件，具有较好的代表性，便于在生产中使用。
【参考文献】
[1] 尹克春，吴焕林.邓铁涛教授调脾护心法治疗心力衰竭经验[J]. 新中医,2002,34(5):11.
[2] 吴焕林，林晓忠，邹 旭.邓铁涛治疗冠心病临床经验探析[J]. 辽宁中医学院学报，2005， 7(4):312.
[3] 阮新民,江 巍,林 宇,等.调脾护心法改善冠状动脉搭桥术患者临床疗效及生存质量的研究[J]. 中国中西医结合杂志,2006,26(1):28.
[4] 阮新民，林 宇,江 巍,等.调脾护心法改善冠状动脉搭桥术患者生存质量的研究[J]. 中医杂志,2006,47(8):586.
[5] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S]. 北京：化学工业出版社,2005，7：10
[6] 桂双英,周亚球.正交试验法优选人参总皂苷的提取工艺[J]. 时珍国医国药，2003,14(10):591.
[7] 郝少君，张正臣.正交设计法研究人参皂苷的最佳提取工艺[J]. 中华医学实践杂志， 2007,6(1):48.
