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3 结果
3.1 倒置显微镜下观察对照组细胞呈梭形,贴壁牢固、密集,折光性好,胞质饱满;实验组中经20 μg/ml TCS作用48 h后细胞间隔增大, 细胞体积缩小,胞浆凝缩,折光率增强,贴壁性差;60 μg/ml TCS浓度作用48 h脱落细胞数增加, 细胞表面出现发泡现象;TCS药物浓度达到100 μg/ml作用24 h后即出现上述特征。
3.2 荧光显微镜下观察经吖啶橙荧光染色后,长链的DNA在荧光显微镜592 nm波长紫外线激发下发出绿色荧光,而RNA发出黄色或黄绿色荧光。本实验的阴性对照组的细胞核DNA为绿色均匀荧光(图1);各实验组均可见到凋亡的细胞:细胞膜完整,细胞核或细胞质可见致密浓染的黄色荧光,出现凋亡小体(图2)。
3.3 透射电镜观察阴性对照组细胞表面微绒毛丰富,胞质内可见线粒体、粗面内质网、游离核糖体,核仁明显,未发现凋亡细胞(图3)。TCS处理细胞可见明显的细胞凋亡:细胞膜完整,染色质局部增多且趋边凝聚,核固缩,有凋亡小体形成;部分细胞表面微绒毛减少或消失,胞质可见大量空泡结构;细胞核趋边,呈半月形;有的细胞核碎裂为一个或多个致密小体(图4)。
3.4 TUNEL法检测结果TCS处理细胞后24 h,采用TUNEL法染色细胞核呈棕黄色的细胞判为凋亡细胞,未被染色为非凋亡细胞。阴性对照组未见凋亡细胞,而阳性对照组和各实验组均可见大量的胞核棕黄色染色细胞,采用图像分析软件定量分析阳性细胞(表1)。表1 TCS作用Caski细胞后图像定量分析结果(略)
表1中凋亡细胞数量显示,在一定浓度范围内(20 μg/ml到60 μg/ml),随着TCS浓度逐渐增加,凋亡细胞的数量也随之增多;TCS的剂量从60 μg/ml增高到100 μg/ml,凋亡数减少;剂量为60 μg/ml时,凋亡数最多。
由表1中的单个细胞平均面积数可以看出,除60 μg/ml 的TCS剂量组略大于阳性对照组外,其它各剂量组的平均面积均显著大于阳性对照组(P<0.05)。