大肠杆菌表达人IL21融合蛋白的纯化和抗原性分析(3)

2025-05-06


    本实验从活化扁桃体细胞中克隆出人IL21的cDNA并进行序列测定,同时构建了中国人IL21表达克隆,并在DH5α宿主菌中表达出与谷胱甘肽转移酶融合的蛋白。采用琼脂糖珠结合的纯化方法,获得了与理论值相符合的纯化条带。在进一步的Western Blotting分析中显示,该种条件下表达的融合蛋白能与IL2的单抗产生结合反应。这一实验结果结合人IL21最新的结构分析和体外活性实验,进一步证实了人IL21在临床与IL2联用或单独使用具有的调节免疫功能和抗肿瘤活性[2,7],并为进一步检测人IL21的各种体内外活性奠定了理论和实验的基础。
【参考文献】
    [1]PARRISHNOVAK J, DILLON SR, NELSON A, et al. Interleukin 21 and its receptor are involved in NK cell expansion and regulation of lymphocyte function[J]. Nature, 2000,408(6808):57. 

  [2]ASANO R, KUDO T, MAKABE K, et al. Antitumor activity of interleukin21 prepared by novel refolding procedure from inclusion bodies expressed in Escherichia coli[J]. FEBS Lett, 2002,528(1/3):70.

  [3]BRENNE AT, BAADE RO T, WAAGE A, et al. Interleukin21 is a growth and survival factor for human myeloma cells[J]. Blood, 2002,99(10):3756.

  [4]KASAIAN M T, WHITTERS M J, CARTER L L, et al. IL21 limits NK cell responses and promotes antigenspecific T cell activation: a mediator of the transition from innate to adaptive immunity[J]. Immunity, 2002,16(4):559569.

  [5]付强,钱冬萌,闫志勇,等. IL21编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 青岛大学医学院学报, 2003,39(1):1517.

  [6]BONDENSGAARD K, BREINHOLT J, MADSEN D, et al. The existence of multiple conformers of interleukin21 directs engineering of a superpotent analogue[J]. J Biol Chem, 2007,282(32):2332623336.

  [7]BAAN C C, BALK A H, DIJKE IE, et al. Interleukin21: an interleukin2 dependent player in rejection processes[J]. Transplantation, 2007,83(11):14851492.


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