马鞭石斛→60℃干燥→粉碎过40目筛→称取石斛干粉→石油醚回流去脂→80%乙醇回流去低聚糖→超声波辅助热回流提取→紫外分光光度计检测吸光度。
2.2 标准曲线的制备
对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品0.025 0 g，加水溶解，250 ml容量瓶定容，即得0.1 mg·ml-1的葡萄糖对照品液。
标准曲线的制备：精密量取上述对照品液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于具塞试管中，分别加水至2.0 ml，各加入5%苯酚溶液1.0 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0 ml，摇匀，放置10 min，置40 ℃水浴保温15 min，取出迅速冷却至室温，紫外分光光度计490 nm处测定吸光度，空白对照以2.0 ml蒸馏水代替葡萄糖液。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为：
Y=0.068 6X-0.000 3（r=0.999）
式中Y——浓度（mg·ml-1）；X——吸光度值（A）多糖的提取率按下式计算：
多糖的提取率（%）=浓度×稀释倍数×样品溶液体积样品质量×100%
2.3 单因素实验温度对多糖提取的影响
分别考察40，50，60，70，80 ，90 ℃对多糖提取率的影响。时间对多糖提取的影响主要考察4 ，8，12，16，20，24，28 min 7个水平；以筛选的最佳温度和提取时间考察超声波提取次数（1，2，3，4次）对马鞭石斛多糖提取的影响。
2.4 提取工艺正交实验设计在单因素实验基础上，对提取温度、提取时间和提取次数进行L9(34)正交实验，筛选最优提取工艺。对筛选出来的最优提取工艺进行精密度、重复性、稳定性等方法学考察，同时将其与传统热回流工艺的提取效率进行比较。
2.5 实验设计和数据统计分析实验过程中所有处理都设3个平行样，实验数据利用SPSS软件分析。
3 结果
3.1 单因素实验
3.1.1 提取温度对多糖提取的影响
以超声波提取16 min，提取1次，考察温度对提取率的影响，结果见图1。随温度的升高，多糖的提取率显著增大，但当温度达到90℃后，提取率增加不明显，故选取90 ℃作为提取温度筛选其他因素。
3.1.2 提取时间对多糖提取的影响
以提取温度90℃，提取1次，考察超声波提取时间（4，8，12，16，20，24，28 min）对马鞭石斛多糖提取的影响。结果见图2。随提取时间的增加，多糖的提取率显著增大，但当时间达到16 min后，提取率却略有降低，故选取16 min作为提取时间筛选其他因素。
3.1.3 提取次数对多糖提取的影响
以提取温度90 ℃，提取时间16 min，考察超声波提取次数（1、2、3、4次）对马鞭石斛多糖提取的影响。结果见图3。表明随提取次数的增加，多糖的提取率显著增大，但提取3次以后，随着提取次数的增加，提取率增加缓慢。由于提取次数的增加，成本迅速增加，因此实际生产中，提取次数不宜过多，故选择2～4次来进行正交实验。
3.2 正交实验在单因素实验基础上，对提取温度、提取时间和提取次数进行L9(34)正交设计见表1，结果见表2。表1 超声波辅助提取正交实验设计，表2 正交实验结果（略）
实验因素的主次分析：从表2中可知，极差值中RC为17.38，RB为5.46，RA为4.9。说明C因素（提取次数）影响最大，其次是B和A，影响因素主次顺序为C>B>A；优水平为A3B2C3，即温度为95 ℃，时间为16 min，提取4次。
实验因素显著性分析：从表3可知，提取温度，时间均对马鞭石斛多糖提取具有显著影响，而提取次数具有极显著影响。表3 正交设计方差分析（略）
3.3 精密度实验按照最优工艺制备
