4 5 未知 以苯作内标物质，计算mi/ms，Ai/As值，并填入下表中。 编 1 2 3 4 5 未知试样 号 mi/ms 甲苯/苯 Ai/As fi mi/ms 乙苯/苯 Ai/As fi 绘制各组分Ai/As~ mi/ms的标准曲线图。分别计算苯、甲苯、乙苯、二甲苯对正庚烷的相对质量较
fi'?正因子。
miAsmsAi
再根据未知试样的Ai值，分别计算未知试样中甲苯、乙苯各自的浓度。
由上式可以看出，本法是通过测量内标物和待测组分的封面积的相对值来进行计算的，因而由于操作条件的变化而引起的误差都同时反映在内标物和待测组分上而抵消，可得到较为准确的结果。当测量样品中某几个组分，或所有组分不能完全出峰时，可采用内标法进行测定。
3. 按照外标法对以上样品进行分析，并与内标法进行比较。
六、思考题
1. 内标法定量有何优点，它对内标物质有何要求？
2. 实验中是否要严格控制进样量，实验条件若有所变化是否会影响测定结果，为什么？ 3. 在内标标准曲线法中，是否需要应用校正因子，为什么？ 4. 试讨论外标法与内标法对样品进行分析的区别。
实验3 荧光法分析VB2
一、目的要求 二、基本原理
1. 荧光分析法的基本原理
光的本质是一种电磁波，具有不同的波长。可见光的波长范围在400～700nm。紫外光的波长范围在200～400nm范围。有色物质可以选择性地吸收一部分可见光区光地能量而呈现不同颜色，某些物质却能选择性地吸收紫外光的能路。物质吸收由光源发出地某些波长可形成特定的吸收光谱。由于物质的吸收光谱与物质的分子结构有关，而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比，所以可以利用物质的特定吸收光谱对其进行定性和定量分析。分光光度法是利用各种物质所具有的这种吸收特性建立的分析方法。
当处于基态的被测物质的分子在吸收适当能量，如光、化学、物理能后，其共价电子从成键分子轨道或非键分子轨道跃迁到反键分子轨道上去，形成分子激发态。分子激发态不稳定，将很快衰变到基态。在分子激发态返回到基态的同时常伴随着光子的辐射。这种现象就是发光现象。荧光则属于分子的光致发光现象。当某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。
1）荧光的产生 此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光）现象也随之在瞬间内消失。
可以引起发荧光的能量种类很多，由光激发所引起的荧光称为致荧光。由化学应所引起的称为化学荧光，由X线或阴极射线引起的分别称为X线荧光或阴极射线荧光。
2）荧光效率 荧光分子不会将全部吸收的光能都转变成荧光，总或多或少地以其他形式释放。荧光效率是指荧光分子将吸收的光能转变成荧光的百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。
荧光效率＝发射荧光的光量分子数（荧光强度）／吸收光的光量子数（激发光强度）
发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰波长，且测定光波量接近于最大发射光波峰时，得到的荧光强度也最大。
3）荧光的猝灭 荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱甚至猝灭 ，这是由于激发态分子的电子不能回复到基态，所吸收的能量无法以荧光的形式发射。一些化合物有天然的荧光猝灭作用而被用作猝灭剂，以消除不需用的荧光。因此荧光物质的保存应注意避免光（特别是紫外光）的直接照射和与其他化合物的接触。在荧光抗体技术中常用一些非荧的色素物质如亚甲蓝、碱性复红。伊文思蓝或低浓度的过锰酸钾、碘溶液等对标本进行得当复染，以减弱非特异性荧光本质，使特异荧光更突出显示。 2. 荧光分光光度计的特点
物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，
以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。 所用的仪器为荧光计或荧光分光光度计，按各药品项下的规定，选定激发光波长和发射光波长，并配制对照品溶液和供试品溶液。 由于不易测定绝对荧光强度，故荧光分析法都是在一定条件下，用对照品溶液测得浓度的线性范围后，再在每次测定前，用一定浓度的对照品溶液校定仪器的灵敏度；然后在相同的条件下，读取对照品溶液及其试剂空白与供试品溶液及其试剂空白的读数，从而计算供试品浓度。
荧光分析法因灵敏度高，故干扰因素也多。溶剂不纯会带入较大误差，应先作空白检查，必要时，应用玻璃磨口蒸馏器蒸馏后再用。溶液中的悬浮物对光有散射作用，必要时，应用垂熔玻璃滤器滤过或用离心法除去。所用的玻璃仪器与测定池等也必须保持高度洁净。温度对荧光强度有较大的影响，测定时应控制温度一致。溶液中的溶氧有降低荧光作用，必要时可在测定前通入惰性气体除氧。
用荧光分析法分析的仪器，称荧光分光光度计。荧光分析法具有灵敏度高（比紫外、可见分光光度法高2~3个数量级），能提供激发光谱、发射光谱、发射强度、特征峰值等信息，在生物、环保、医学、药物、石油勘探等诸多领域都有广泛的应用。本仪器不仅能直接、间接地分析众多的有机化合物；另外，还可利用有机试剂间的反应，进行近70种无机元素的荧光分析。荧光的光谱特征是荧光光谱总是滞后于激发光谱即斯托克斯位移。
3. 荧光强度与物质浓度的关系
对于某种荧光物质的稀溶液，在一定强度的激发光照射下，荧光物质的发射强度与入射光的强度以及检测器的放大倍数成正比，可以用以下公式表示： F=KIFC
K-----与仪器系统有关的常数 I-----入射光的强度 F-----荧光物质的荧光效率 C-----荧光物质的浓度
当样品浓度增大到一定值时，荧光强度与浓度就不成线性关系。主要是由于当样品浓度较高时，液池前部的溶液强吸收则发生强的荧光，液池后半部的溶液不易受到入射光照，不发生荧光，所以荧光强度反而降低。同时由于在浓度较高的溶液中，可能发生溶液溶质与溶质间的相互作用，形成一种不致荧光的复合物，从而造成荧光强度反而降低的现象。
三、仪器和试剂 四、试验步骤 五﹑ 数据及处理 六、思考题
实验4 高效液相色谱法检测常见的食品添加剂
一. 指导思想
在掌握了基本实验，具备一定的实验能力之后，为培养理论联系实际的能力，同时进一步培养学生的基本操作技能，通过综合设计实验训练，调动学生的积极性，综合运用知识和实验技能， 使所学的知识融会贯通，培养学生独立分析问题和解决问题的能力。
二. 实验目的
食品添加剂指“为改善食品品质和色、香、味，以及为防腐或根据加工工艺的需要而加入食品中的化学合成或天然物质”。它是食品加工必不可少的主要基础配料，其使用水平是食品工业现代化的重要标志之一。食品添加剂在食品工业中起着重要作用，各种食品添加剂能否使用，使用范围和最大使用量各国都有严格规定，受法律制约，以保证安全使用，这些规定是建立在一整套科学严密的毒性评价基础上的。为保证食品质量安全，必须对食品添加剂的使用进行严格的监控。因此，食品中食品添加剂的检测是十分必要的。
各种食品添加剂中，主要有防腐剂（苯甲酸、山梨酸）、人工合成甜味剂〔主要是糖精钠、乙酰磺胺酸钾（安赛密）〕以及人工合成色素（柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红）等被广泛用于各种食品加工过程中。对食品中的各种添加剂的检测最有效的方法则是高效液相色谱法，可以充分利用高效液相色谱的分离特性分析食品中常见的添加剂。
三. 实验要求
1. 要求学生能够在老师的指导下查阅文献，系统整理前人的分析测试方式，并根据本实验室的条件选择较佳的分析测试方法。
2. 在选定分析条件下，独立完成一个实际样品的分析，从取样、溶解到分析方法的选择、测定条件的优化等。
3. 要求学生在分析测试过程中，灵活调试优化测试方法，具有综合实验能力、分析解决问题的能力。 4. 根据实验结果按照实验报告的格式撰写实验报告。
