微生物育种复习题(答案)(2)

2025-08-15

意义:繁衍微生物的后代,保证遗传的稳定性,修补DNA分子因突变造成的缺陷和损伤。 2.紫外线对枯草芽孢杆菌诱变育种的基本原理、步骤和注意事项?

基本原理:紫外线是一种罪常用的物理诱变因素,它的主要作用是使DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶间形成二聚体,阻碍双链的分开,复制和碱基的正常配对,从而引起突变。

步骤:1、菌悬液的制备 2、平板制作 3、紫外线处理 4、稀释 5、涂平板 6、培养 7、计数 8、观察诱变效应

注意事项:1、紫外线诱变时,一定要在红光下进行,在暗环境下培养,避免光修复。 2、紫外线诱变时,要打开皿盖,紫外线穿透力差。

3.阐述紫外线照射引起微生物突变的原理以及诱变的操作步骤和技术要点

紫外线的诱变原理:紫外线会引起DNA与蛋白质的交联,胞嘧啶和尿嘧啶的水合作用,DNA链的断裂,嘧啶二聚体的形成(单链上相邻两个胸腺嘧啶之间或双链相对应的两个胸腺嘧啶之间) 操作步骤:P38 技术要点:

4.营养缺陷型检出有哪几种常用方法?并阐述各自的原理如何? P124结合书本

点植对照法:

影印法:将稀释后的待测样品涂布到完全培养基上,适宜条件培养,等长出菌落之后用影印法将菌落转印到基本培养基上,适宜条件培养,等菌落长出来之后,对比原来的培养基,原来有菌落而在基本培养基上没有长出来的菌落是营养缺陷型。

夹层法:先在培养皿底部倒入一层基本培养基,凝固后,倒入含有菌体细胞的基本培养基,待凝固后,继续加第三层基本培养基。培养后平板上首先出现的菌落,为野生型菌落。此时在平皿底部做好颜色标记。接着加上一层完全培养基,经培养,如果在基本培养基上不长而在完全培养基上生长的小型菌落,可能是营养缺陷型。 限量补充培养法:

5.在工业微生物菌种使用中,菌种发生退化的原因是什么?如何防止菌种的退化以及对菌种进行复壮。

退化的原因:(一)基因突变 1、基因突变导致菌种退化 (1)表型迟缓现象 (2)双核或多

核脱离现象 (3)非正倍体或部分双倍体分离

2、质粒脱落导致菌种退化

(二)连续移代 菌种移解代数越多,发生突变的概率就越高

(三)培养和保藏条件的影响 不良的培养条件,如培养基组成、PH值、通气等和

保藏条件如营养、培养基含水量、温度、氧气等,不仅会诱导低产基因型菌株的出现,而且会造成低产基因和高产基因细胞的数量比发生变化

菌种退化的防治:1、尽量减少传代

2、菌种经常纯化 (1)注重菌落的纯化 (2)单细胞或单孢子的纯化 3、创造良好的培养条件

4、用单细胞移植传代 对于霉菌和放线菌,由于菌丝可能是多核的,所以尽

可能用单核的孢子移接,如采用棉花团沾取孢子接种

6

5、采用有效的菌种保藏方法 (1)良好的保藏培养基 (2)良好的保藏的温

度条件

复壮方法:1、纯种分离 (1)菌落纯 是只要求达到菌落纯化的水平,通过稀释平板法、划线

法、表面涂血法等常规操作法,该方法较为粗放,适用于菌退化不太严重的情况

(2)细胞纯 采用单细胞或单孢子分离法,也可以二者结合,先用前

一种方法获得较纯的菌种再采用单细胞或单孢子分离法进一步纯化

2、淘汰法 通过物理、化学的方法处理菌种(或孢子),使大部分死亡(80%

以上),存活的菌多为生长健壮者,可从中选出优良菌种来

3、宿主体内复壮法 对于寄生型微生物如苏云金杆菌、白僵菌、多角体病毒等,由

于长期使用,其毒力会下降,导致杀毒效率降低的衰退现象。这时可以用菌种却感染青菜虫幼虫等,然后从致死的虫体上重新分离,经过几次重复感染与分离,就可以逐步恢复和提高毒力

6.列举5种以上常用的工业微生物菌种保藏方法,并简要说明各自的优缺点?

保藏方法:斜面保藏、石蜡保藏、干燥保藏(沙土管保藏、滤纸条保藏、无水硅胶保藏法、麸皮保藏法)、冷冻干燥保藏法、真空干燥法、液氮超低温保藏法、液相保藏法 优缺点:

斜面保藏

优点

操作简单,使用方便,特别适合于非长期保藏的菌种以及不能采用低温干燥方法保藏的菌种

缺点

容易变异,因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的,屡次传代会使微生物的代谢改变,而影响微生物的性状;污染杂菌的机会亦较保存时必须直立放置,所占位置较

,同时也不

石蜡保藏

制作简单,不需特殊设备,且不需经常移种,效果好

便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后,接种环在火焰上烧灼时,培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅,应特别注意

滤纸条保藏 较液氮、冷冻干燥法简便,不需要特殊设备 沙土管保藏 抗生素工业生产中应用最广,效果亦好。

除适宜于一般微生物的保藏外,对一些用冷冻干

营养细胞效果不佳

液氮超低温保藏法

燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏,而且性状不变异

需要特殊设备

真空干燥法

设备相对简单,操作方便

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