2.5 统计
所有数据均用SPSS13.0统计，其中冻耳治疗后外观评价用秩和检验Mann-Whitney U法，SOD、MDA和TNFα测定结果用方差分析LSD法。
3 结果
3.1 冻耳外观变化
复温后兔耳开始发红发热，随后变紫、肿胀、下垂。肿胀逐渐加剧，12 h后部分兔耳出现浆液性水泡，泡液无色或淡黄色，随后水泡增大或新水泡形成。24 h后肿胀程度不再增加，水泡不再增大或无新水泡形成。48 h后部分兔耳冻区有黄色液体渗出。治疗后冻耳肿胀逐渐消退，治疗结束（治疗4 d）后各组冻耳均已不见明显肿胀。高、中浓度胡椒供试液组治疗结束后分别有4只和2只家兔冻耳外观同正常兔耳（冻耳表皮光滑平整，未见坏死，冻耳颜色、触感、弹性和厚度均与未冻伤的左耳完全一样），其它家兔冻耳均有不同程度的皱缩变形和硬化、表面凹凸不平、表皮坏死，个别家兔冻耳表面有硬痂产生。高浓度胡椒供试液组治疗结束后冻耳外观评价明显好于溶剂组（P<0.01）。结果见表1。表1 胡椒对轻度冻伤兔耳形态改变的影响（略）
3.2 冻耳治疗后病理变化
治疗后高、中浓度胡椒供试液组兔冻耳表皮均修复完整，真皮水肿及炎症均明显消退，部分兔冻耳真皮已无水肿和炎症表现（高浓度5只，低浓度3只），近半数兔冻耳毛囊和皮脂腺数量正常（高浓度6只，中浓度4只），未见毛囊和皮脂腺坏死，冻耳总体恢复程度和速度明显好于溶剂组，见图1。
3.3 SOD测定结果
治疗2 d后，高、中浓度胡椒供试液组血清中SOD活力均显著高于溶剂组（P<0.01）。治疗4 d后各组血清中SOD活力已无明显差异，但冻耳组织中SOD活力有明显不同，高、中浓度胡椒供试液组显著高于溶剂组（高浓度P<0.01，中浓度P<0.05）。结果见表2。表2 胡椒对兔耳轻度冻伤后血清及冻耳组织中SOD活力的影响（略）
3.4 MDA测定结果
治疗2 d后，高、中浓度胡椒供试液组血清中MDA量显著低于溶剂组（P<0.01）。治疗4 d后各组血清中MDA量均一定程度下降，与正常组相比已无明显差异，但此时冻耳组织中MDA量有差异，高、中浓度胡椒供试液组显著低于溶剂组（高浓度P<0.01，中浓度P<0.05）。结果见表3。表3 胡椒对兔耳轻度冻伤后血清及冻耳组织中MDA含量的影响（略）
3.5 TNF-α测定结果
治疗2 d和4 d后，高、中浓度胡椒供试液组血清中TNF-α量与溶剂组相比均无明显差异，但治疗4 d后冻耳组织中TNF-α量显著高于溶剂组（P<0.01）。结果见表4。表4 胡椒对兔耳轻度冻伤后血清及冻耳组织中TNF-α含量的影响（略）
4 讨论
兔耳冻伤后形态改变的范围实际上反映了冻耳存活的组织细胞面积和存活量。所以，治疗结束后，通过兔冻耳外观正常与否及形态异常范围可评价药物抗冻伤的疗效，药物如能减少耳冻伤后细胞坏死的数量和范围，则冻耳形态改变区域就小。此次研究结果显示，高浓度胡椒供试液能显著降低兔耳轻度冻伤后形态改变程度（P<0.01）,并且治疗结束后4/10冻耳形态与正常兔耳完全一致。
冻伤4 d（治疗2 d）后兔血循环中SOD活力还明显低于正常，相应的脂质过氧化物MDA含量明显高于正常，但胡椒供试液能显著增强血液中SOD活力，减少MDA的产生。冻伤6 d（治疗4 d）后血循环中SOD活力和MDA水平基本恢复正常，但冻耳组织中SOD活力明显低于正常，另外MDA量也明显高于正常，更有意义的是胡椒供试液能显著增加冻耳组织中SOD活力并降低MDA水平。由此说明，兔耳局部轻度（主要是Ⅱ度）冻伤后不仅能打破受冻局部组织氧化抗氧化系统的平衡，并且因此可使全身血循环中氧化抗氧化系统受累，最终导致失衡。氧化抗氧化系统失衡的顺序为局部冻伤组织到全身血循环，而恢复的顺序则正好相反。另外实验结果也说明，冻伤局部应用胡椒70%乙醇提取液能有效增加机体抗氧化能力，抑制受冻组织氧化损伤。
