2.2 结构鉴定
分离出的3种化合物分别为A、B、C,其结构如图2所示。
其核磁共振1H-NMR谱与已知化合物谱图比对可知b为Epilaserine,(2,3-Dimethyl-but-2-enoicacid-1-(7-methoxy-benzo〖1,3〗dioxol-5-yl)-2-(2-methyl-1-methylene-but-2-enyloxy)-propylester)。其1H-NMR谱如图4所示。
图2中c为白色针状晶体(丙酮),易溶于氯仿、乙醚,难溶于水、甲醇。Mp:138 ℃-139 ℃(CHCl3),Liebermann-Burchard反应呈阳性,提示为甾体化合物。其波谱数据中1HNMR(CDCl3)δ:5.34(1 H,d,J=8.92 Hz,H-6),3.51(1 H,d,J=5.87 Hz,H-3);13CNMR(CDCl3)δ:71.85(d,C-3),121.73(d,C-6),140.79(s,C-5),11.88(q,C-18),19.41(q,C-19)。均与已知化合物β-谷甾醇(β-Sitosterol)特征峰符合,且c在数种展开剂条件下进行薄层层析,其Rf值与β-谷甾醇对照品一致,两者混合熔点不下降。由此可确定c为β-谷甾醇(β-Sitosterol)。
2.3 Laserine、Epilaserine的药理活性研究
药物:将分得的Laserine和Epilaserine用乙醇溶解,备用。分组:Laserine浓度分别为10-4,10-5,10-6,10-7,10-8 mol/L 5组;Epilaserine浓度分别为10-4,10-5,10-6,10-7,10-8 mol/L 5组;空白对照组。 PC12细胞接种于经多聚赖氨酸包被过的35 mm培养板中,加入10 %(V/V)马血清和5 %胎牛血清的DMEM培养液,并根据分组不同加入不同浓度的Laserine和Epilaserine,置37 ℃,5 % CO2条件下培养。A549 细胞用含10%小牛血清的DMEM 高糖培养基在37℃、5%CO2细胞培养箱内进行培养,湿度75%。HL-60细胞在RPMI1640培养基中培养,其中有10%的小牛血清,100 U/ml青霉素,和100 mg/L链霉素,在5% CO2的37 ℃孵箱中孵育。
2.3.1 Laserine对HL-60的抑制活性 见图5。
2.3.2 Epilaserine对HL-60的抑制活性
见图6。活性实验的结果显示Laserine 对HL-60有弱的抑制作用,Epilaserine对HL-60有强效抑制作用,其半数有效量IC50为0.52 μm。
3 讨论
胡萝卜具有抗衰老、抗氧化等多方面的药理作用[6]。为进一步研究胡萝卜的活性成分,从中发现具有这些药理活性的单体化合物,对胡萝卜的脂溶性部位进行了化学成分研究,并从中分离得到了β谷甾醇、Laserine和Epilaserine 3个化合物。
胡萝卜籽为中医理论中的一种常见药物,国内对胡萝卜汁的药理活性也有报道,但是对胡萝卜脂溶性成分的研究较少[7,8]。对胡萝卜的石油醚部位进行研究,并从中分离出具有一定活性的Laserine和Epilaserine 2个化合物。
HL-60细胞为白血病细胞,是研究粒细胞诱导分化的理想模型,肿瘤细胞诱导分化的研究对肿瘤治疗和抗癌药物的筛选都具有重要意义[9]。活性实验的结果显示Laserine 对HL-60有弱的抑制作用,Epilaserine对HL-60有强效抑制作用。Laserine和Epilaserine是从胡萝卜中分离得到,为深入研究胡萝卜中的天然活性成分提供了指导。4
【参考文献】
[1]胡喜来,张惠梅,孙治强. 胡萝卜新品种‘红参’[J]. 园艺学报,2006(6):1412-1414.
[2]江苏新医学院. 中药大辞典[M]. 上海:科学技术出版社,1985:3232-3233.
[3]王文祥. 彩色胡萝卜[J].中药材,2003(4):48-50.
[4]蔡锦贤,荆晶,陆阳. 天然聚乙炔醇的研究进展[J]. 中草药,2007(4):62-66.