维胃方对大鼠胃溃疡的疗效及血清白介素2影响的研究(2)

2025-04-29

  1.3 试剂 100%冰醋酸(广东省光华化学厂有限公司,批号20070903);水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司,批号20060220);雷尼替丁胶囊(广东佛山阿特维斯制药有限公司,批号0802763);IL-2放免试剂盒(北京普尔伟业生物科技有限公司提供,批号 20081024)。

  1.4 仪器低速离心机 LD5-2A型(北京医用离心机厂); LeicaRM2135切片机(德国 Leic公司);光学显微镜(Olympus公司);SN-695B型放免测量仪(上海日环仪器一厂)。

  2 方法

  2.1 分组及给药 按完全随机法分为7组,每组8只。正常组:自由饮水,进食;模型组、自愈组:冰醋酸致大鼠胃溃疡术后,自由饮水进食;维胃方低、中、高剂量组、雷尼替丁组:冰醋酸致大鼠胃溃疡术后第4天开始,分别灌胃低、中、高剂量维胃方药液、雷尼替丁混悬液,1次/d,连续7 d。造模各组术后次日起给予自由饮食。模型组在造模后第4天取材,其它各组均在造模后第11天取材。

  2.2 造模参照Takagi等[1]的经典造模方法,并加以改进。大鼠造模前24 h 禁食不禁水。按3.5 ml/kg体重腹腔内注射10%水合氯醛麻醉。仰卧位四肢固定,腹部剃毛、消毒,铺手术孔巾,于剑突下腹中线纵向打开腹腔,手术切口长约2 cm,将胃轻轻移出腹腔,在胃前壁浆膜面窦体交界处靠胃窦侧用100%冰醋酸浸泡过的直径为5 mm的圆形滤纸压贴30 s×2次,用生理盐水棉签轻轻抹洗2 次,然后将胃还纳腹腔,分层缝合腹壁肌肉和皮肤,75%酒精棉球消毒切口及周围。

  2.3 指标检测

  2.3.1 血清IL-2含量测定 腹主动脉采血约3ml于普通负压采血管中,4℃冰箱中静置待自然凝固收缩后, 以2 000 r/min离心10min,分离血清保存于-20℃冰箱。采用放射免疫法测定血清IL-2含量,操作按照说明书进行。

  2.3.2 测量胃液pH值 在剑突下偏左剪开腹腔,暴露胃部。结扎贲门,于十二指肠和食管处剪断取出鼠胃,由幽门挤出少量胃液于pH试纸上,读取并记录pH值。

  2.3.3 溃疡面积 由幽门处向胃内注入10%中性福尔马林溶液10 ml,固定10 min后沿胃大弯剪开,展平,用游标卡尺测量溃疡面的最大横径及最大纵径,分别记为d1、d2。溃疡面积(S)按公式S=π×d1×d2×1/4计算(π取3.14)。

  2.3.4 胃黏膜病理组织切片制备 以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材,放入10%中性福尔马林溶液中固定,常规脱水、包蜡、切片、HE染色后于光学显微镜下观察。

  2.4 统计学处理 实验数据用(±s)表示。多个样本均数比较用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间均数两两比较若方差齐性,用LSD法;若方差不齐性,用Dunnett's T3方法。以上数据均用SPSS13.0统计软件进行分析。显著性水平P<0.05。

  3 结果

  3.1 肉眼观察标本正常组:胃黏膜光整完好,呈淡红色,无充血、水肿、糜烂等。模型组:浆膜面造模处有黄色炎性分泌物与周围组织粘连,胃窦处见火山口样溃疡,底部覆盖有黄白苔,部分标本有多个溃疡点或溃面。自愈组:浆膜面充血,与周围有粘连,胃窦区黏膜溃疡愈合不全,可见苍白色瘢痕组织增生。雷尼替丁组:浆膜面少有粘连,胃窦区黏膜溃疡多数基本愈合,表面粗糙色白。维胃方低、高剂量组:部分可见浆膜面粘连,胃窦黏膜可见少数溃疡点或瘢痕组织增生;维胃方中剂量组:浆膜面少粘连,胃黏膜表面多数已愈合,极少溃疡点或仅见小范围瘢痕增生。

  3.2 镜下观察病理切片 正常组:黏膜层完整,腺细胞排列均匀,黏膜下层、肌层、浆膜层完好。模型组:溃疡处粘膜缺损大,腺体完全被破坏;黏膜下层毛细血管内见血流淤滞,部分毛细血管破裂、出血,粘膜下层、浆膜层见大量炎性细胞浸润。自愈组:部分黏膜缺损达黏膜肌层,再生腺细胞排列紊乱;黏膜下层有炎细胞浸润,见明显血栓。雷尼替丁组:缺损较小,表面见新生上皮细胞及腺细胞,排列致密不整齐;黏膜下层有炎细胞浸润,肌层见瘢痕纤维形成。维胃方各剂量组:维胃方组低、高剂量组可见缺损达腺细胞层,再生腺细胞密度不匀,黏膜下层炎细胞浸润,其中高剂量组腺体细胞增生数量较多,黏膜下血管未见明显病理改变,但仍有炎性细胞浸润;中剂量组黏膜基本完整,腺体细胞增生数量较多;黏膜下层仅见少量炎性细胞浸润。

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