作者：李明,陈伟强,胡太平,张丽蓉,蔡尤彪,古宏标
【摘要】 目的 研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNFα)和白细胞介素6(IL6)生成的影响。方法 培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，分别加入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS，终质量浓度1 μg/mL)和不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50 μmol/L)进行干预，并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24 h细胞上清，用Griess法检测NO产量;用Elisa法检测TNFα、IL6浓度。结果 与空白组比较，LPS明显促进了RAW264.7细胞NO、TNFα、IL6等炎症因子的生成;穿心莲内酯单独作用不影响炎症因子的表达，但穿心莲内酯能显著下调LPS诱导的炎症因子表达，与LPS组差异有显著性。结论 穿心莲内酯可明显降低LPS诱导的巨噬细胞炎症因子表达，抑制炎症反应。
【关键词】 穿心莲内酯;巨噬细胞;炎症因子;内毒素
)Abstract:Objective To investigate the inhibitive effects of andrographolide on lipopolysaccharideinduced inflammation factors secretion in macrophage cells.Methods A macrophage cell line RAW264.7 cells were cultured in vitro,and treated with different concentration of andrpgrapholide in the presence or absence of lipopolysaccharide (LPS). The production of inflammatory factor nitric oxide (NO),tumor necrosis factorα(TNFα) and interleukin6 (IL6) in the supernatant was measured by Griess reagent and Elisa,respectively.Results After stimulated with LPS,the content of NO,TNFα and IL6 were markedly upregulated. Pretreated with andrographolide significantly inhibited LPSinduced inflammation factors expression levels,which was statistically significant compared with LPS group(P<0.05).Conclusion These results indicated that andrographolide might effectively blocks inflammation by downregulating production of NO,TNFα and IL6.
Key words:andrographolide;macrophage cells; inflammation factor; lipopolysaccharide
目前，炎症在心血管疾病、肿瘤中的促进作用日渐受到重视，抑制炎症反应防治心血管疾病及肿瘤成为研究的重点[1-2]。穿心莲为爵床科植物穿心莲属植物穿心莲干燥地上部分，作为常用中药，具有清热解毒、凉血消肿等功效。穿心莲内酯是穿心莲的主要药效成分，有研究表明，穿心莲内酯有显著的抗炎活性，能抑制二甲苯和醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加，还对大鼠蛋清蛋白、角叉菜胶足趾注射致炎模型有明显的抗炎作用[3]。炎症反应时，巨噬细胞在细菌及其内毒素的刺激下，分泌大量的炎症因子，如氧化亚氮(NO)、TNFα和IL1β等，这些炎症因子又可以进一步活化巨噬细胞，形成恶性循环，加重炎症反应。本研究通过观察穿心莲内酯对NO、TNFα和IL1β等炎症因子表达的影响，探讨其抗炎活性。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
穿心莲内酯(四川广汉市维康植化有限公司);细菌内毒素(LPS，E coli Serotype 055:B5，美国Sigma公司);NO检测试剂盒(南京建成生物公司);TNFα、IL6 Elisa检测试剂盒(美国R&D公司);胎牛血清(杭州四季青公司);DMEM培养基(美国Gibco公司);酶标仪(美国BioRad公司)。
1.2 细胞培养及干预实验
小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞由本室保存。用完全DMEM培养基(含体积分数10%胎牛血清、质量浓度100 U/mL 青霉素和100 μg/mL链霉素)，体积分数5%CO2，37 ℃条件下传代培养。取生长状态良好的RAW264.7细胞，质量分数0.25%胰酶消化，用DMEM培养基调整细胞浓度为1×106/mL，接种到24 孔培养板内，待细胞生长至80%融合后，加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度分别为1、10、50 μmol/L)孵育1 h，然后加入LPS(终质量浓度1 μg/mL)进行刺激。实验分组：正常对照组、穿心莲内酯单独作用组、LPS组和穿心莲内酯加LPS组。
