近年来，随着大孔吸附树脂在天然产物活性成分分离方面应用的日益广泛［6，7］，其优良的分离纯化效果，可反复再生使用和低成本的应用特点，非常适合于大生产的要求。为此，本文采用大孔吸附树脂法，对迷迭香中迷迭香酸的分离纯化工艺进行研究。现报道如下。
1 仪器与材料
1.1 仪器LC-10AVP高效液相色谱仪，日本岛津公司产品；METTLER TOLEDO AL204 电子天平，瑞士梅特勒公司产品；R-205B旋转蒸发仪，上海申胜生物技术有限公司产品；PHB-5型笔试pH计，上海康仪仪器有限公司产品。
1.2 试剂大孔吸附树脂：D101，天津农药股份有限公司产品；AB-8，南开大学化工厂产品；XAD-2，美国罗门哈斯公司产品；HP-20，日本三菱化学公司产品；迷迭香酸对照品，天津尖峰天然产物公司产品；甲醇为色谱纯，美国Dima公司产品；其他试剂均为分析纯，广州化学试剂厂产品。
1.3 药品迷迭香粉末：迷迭香由海南舒普生物科技有限公司提供，经该公司鉴定为唇形科植物迷迭香Rosmarinus officinalis L.的干燥地上部分，粉碎成粗粉，备用。
2 方法与结果
2.1 迷迭香酸的含量测定［8］
2.1.1 色谱条件色谱柱：Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm，4.6 μm)，流动相：甲醇－0.1％甲酸溶液(45∶55，V/V)，柱温：30℃，检测波长：330 nm，流速：0.8 ml/min。
2.1.2 迷迭香酸标准曲线的测定精密称取迷迭香酸20.0 mg，置25 ml容量瓶中，用稀乙醇溶解后，定容，混匀，得0.8 mg/ml对照品溶液。再精密量取1.0 ml该对照品溶液，置100 ml的容量瓶中，用稀乙醇定容，得0.008 mg/ml的迷迭香酸对照品溶液。分别吸取0.8 mg/ml迷迭香酸对照品溶液5，10，20 μl以及0.008 mg/ml迷迭香酸对照品溶液5，10，20 μl，按上述色谱条件分别进样测定，记录迷迭香酸对应的色谱峰面积。以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），线性回归得回归方程：Y=3 455 806.475X + 218 212.581 8，r=0.999 6。表明迷迭香酸在0.04～16.0 μg范围内进样量与色谱峰面积具有良好的线性关系。
2.1.3 样品溶液的制备及测定称定迷迭香水提物200.0 mg或迷迭香提取物（已经树脂纯化）20.0 mg，置100 ml容量瓶中，加稀乙醇约50 ml，超声10 min，冷却后用稀乙醇定容，混匀，0.45 μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为样品溶液。树脂静态和动态实验中的溶液样品，根据样品中迷迭香酸可能的含量，直接混匀或加入一定量的稀乙醇稀释混匀，0.45 μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为样品溶液。取上述各种样品溶液适量，进样20 μl，采用外标法测定迷迭香酸的含量。
2.2 吸附原液的制备称取迷迭香粉约20 kg，依次加入160，120 L纯水，90～95℃提取2次，过滤，合并两次提取液，减压浓缩，喷雾干燥，混匀，得迷迭香水提物3.5 kg，经测定，迷迭香酸的含量为2.72%（干计），冷藏备用。临用前，取上述迷迭香水提物适量，加纯水，根据需要制成至固体含量1%～10%（质量体积百分数）的水溶液，作为吸附原液。
2.3 吸附树脂的预处理树脂先用乙醇浸泡溶胀24 h，湿法装柱，用95％乙醇洗脱，至流出液加5倍量的纯水不变白色浑浊为止。再用大量的纯水洗尽柱内乙醇，然后依次用3倍树脂体积的5%盐酸、纯水、4％氢氧化钠浸泡、流过树脂柱，最后用大量纯水洗至流出的水近中性，作为湿树脂，备用。
2.4 吸附量和解吸率的计算试验中的吸附量、吸附率和解析率的计算公式如下：
Q（mg/ml湿树脂）=（C0V0－CeVe）/V式①
A（%）=（C0V0－CeVe）/C0V0×100%式②
