看明白新药如何开发溶出方法，才能做好仿制药
前言
前文依托考昔为例：适度区分力的溶出方法开发与验证指出，任何具有区分力的溶出方法的开发需要以下步骤： 设定目标溶出曲线（例如，15min内，溶出＜50%，30min溶出＞85%）；绘制实验流程图，标明预期结果和下一步工作；优化溶出介质、转速、装置和介质体积；验证溶出方法的区分力；验证溶出方法的重复性和耐用性，满足变异要求（即第一个取样点RSD＜20%，其他RSD＜10%）；如对溶出方法的区分力满意，可以不满足漏槽条件。
接下来的这篇文章是对该思路的完美诠释！该文章由达沙替尼片原研公司——百时美施贵宝发表。该溶出方法开发于达沙替尼片一期临床结束后、二期临床开始前，约在2003年。该文描述了在新药研发中如何系统的开发溶出方法。 难溶性药物是在研小分子药物的主流。其仿制药处方工艺开发的难点在于找到“目标曲线”。谢沐风老师为仿制难溶性药物设计的溶出路线图为：原研如没有一条曲线能在45~120min达到85%，则可适当放宽试验条件（以原研制剂样品批内/批间精密度为准，加大转速或加入低浓度表面活性剂）、且无突释和拐点，这样的曲线通常被认为是最具体内外相关性，也是最理想的曲线。这是剖析原研，找到原研
的那一根“筋”，指导仿制药处方工艺的开发。
达沙替尼（Dasatanib, BMS-354825）是一种强效的酪氨酸激酶多靶点抑制剂。为继尼洛替尼之后另一个用于伊马替尼耐药和不耐受的慢性粒细胞白血病（CML）慢性期的药物。与针对Bcr-Abl融合蛋白单靶点的伊马替尼和尼洛替尼相比，达沙替尼属于多靶点药物，对5种关键性致癌酪氨酸蛋白激酶，即BCR-ABL、SRC、c-KIT、PDGFR和Ephrin（EPH）均有作用。
该产品最早由百时美施贵宝公司研发，2006年6月在美国获准上市，11月在欧盟上市。我国已进口，商品名施达赛?。国产药品为正大天晴，于2013年上市。达沙替尼为BCSⅡ类。文献报道其溶解度为0.0128mg/ml，logP为1.8，pKa值（强酸）为8.49，pKa值（强碱）为7.22。 运用实验设计原则开发溶出方法：达沙替尼片
为了支持二期临床，溶出方法必须快速完成开发。最终确定的溶出方法为：1000mL，pH4.0醋酸盐缓冲液 1%Triton X-100，USP桨法，60 rpm。简介DOE通常用来设计开发制药生产工艺。从分析方法方面来看，DOE可以用于方法开发和验证，建立控制空间，目的是更好的理解关键参数及其细小变化带来的影响。现在DOE已经应用于HPLC、GC等方法开发。但是尚未用于溶出方法的开发。
为了加快上市，同时最终上市的规格未确定，我们选择了常
规的制粒工艺。达沙替尼为BCSⅡ类（低溶高渗），溶出度是该处方的一个关键质量属性。开发一个具有区分力的溶出曲线，评价批间变异，比较不同规格，以支持生物豁免。 为了加快进度，溶出方法开发需要：
可利用的资源有限，因为原料药有限；时间不超过3个月，包括4周稳定性数据。
系统的方法开发可以发现关键参数及其相互关系。实验设计为：在一个6杯溶出仪中3个不同条件，每个条件2片。这个设计用于摸索溶出方法的设计空间。当确定最终的溶出条件时，片子的数量增加，以保证把片与片之间的变异考虑在内。这种方法的优点在于：
快速。每次筛选3个条件；资源效率高。最少的资源（人员，材料，设备，等），特别是片子用的少；聚焦开发。矩阵方法聚焦在关键变量，关注全局，即寻找最全面的溶出方法，能够区分生产条件的变化。
开发目标为溶出慢（20min时，溶出不超过85%）并且全面（60min时，超过95%）。如前所述，最终上市规格未确定，溶出方法应覆盖20-150mg。本文采用150mg规格开发溶出方法。如果用低规格的片，可能最高规格（150mg）在选定溶出介质中并不能完全溶出。
实验计划是根据溶解度曲线制定的。API溶解度随pH升高显著降低。当pH2.6，溶解度为18.4mg/mL；pH4.5，溶解
度为0.08mg/mL；pH7.0，溶解度低于1mg/mL。同时它的碱性pKa值为6.8和3.1，和弱酸性pKa~10.9。这表明，溶出介质pH的微小变化将导致溶出曲线的显著差异，尽管满足漏槽条件。药典中的溶出条件（pH1.2，4.5，6.8）不合适。pH1.2介质中，10min溶出超过90%，溶出特别快。pH4.5介质中溶出不完全，60min溶出小于40%；pH6.8介质中，60min溶出小于2%。pH对溶出曲线具有关键影响，基于此，设计以下实验。实验计划见图1。材料与方法1制剂处方为了进行二期临床实验和商业化生产，开发了普通的制粒工艺，制备了薄膜包衣片，包括20、50、70、150mg规格。最初产品开发时微晶纤维素全部内加。在开发过程中部分外加以提高颗粒的可压性。这两种处方量完全相同，仅在MCC的内、外加上不同。溶出方法学开发使用了这两种处方。2溶出介质pH3.0-4.0柠檬酸盐储备液 配制柠檬酸盐储备液（pH3.4）：9.8g一水柠檬酸和1.0g二水柠檬酸钠溶于1L去离子纯化水中，用氢氧化钠或磷酸调节pH至3.4（±0.05）。其他pH值的柠檬酸盐缓冲液，使用磷酸或氢氧化钠将pH值调整至±0.05以内。
pH4.0-4.8醋酸盐储备液 配制柠檬酸盐储备液（pH4.5）：3g三水醋酸钠和14mL 2N醋酸溶液，溶于1L去离子纯化水中，用冰醋酸调节pH至4.5（±0.05）。其他pH值的醋酸盐缓冲液，使用冰醋酸或氢氧化钠将pH值调整至±0.05以
内。
加入表面活性剂的介质配制 按体积比加入到目标pH介质中，充分溶解。如果需要，检查和重新调节pH。3仪器如无说明，采用USP二法、60 rpm、1000mL、37℃。溶出曲线取样点10、15、20、30、45、60min。溶出无穷大点为200rpm 搅拌1h。如无说明，每个溶出条件用2片（每次3个条件，6个溶出杯）。结果与讨论1方法开发-原处方溶出介质的pH在溶出方法中是非常关键的，有两个原因。第一，可以发现pH作为溶出主要驱动力的范围。第二，溶解度曲线可以发现潜在的目标溶出条件，它是在溶出平衡的条件下测的，得到的溶解度并不能反应溶出介质的表观溶解度。
6个溶出杯，3个pH介质，1片/杯（150mg 原处方薄膜衣片），2个溶出杯/pH介质。如图2，这种方法可以快速开发溶出方法从pH3.0至4.4。图2可以看出，当溶出介质pH升高时，溶解曲线越来越慢。数据见表1。可以分为3个不同的区域。第一个区域（pH小于3.4），溶出迅速、完全。第二个区域（pH3.4-3.6），可以接受的曲线，20min溶出少于80%；60min溶出大于95%。这些结果与pH溶解度一致，这表明pH3.4 与150mg规格的漏槽条件非常接近。第三个区域（pH3.8至4.4），溶出不完全。溶出终点小于95%，视为未达到漏槽条件。
实验B，第一区域pH3.0-3.4。转速降为50rpm，以降低溶
