细胞生物学实验室管理办法
1、细胞生物学实验室是进行各种细胞培养的净化级实验室，由实验人员提出申请，填写细胞培养室使用申请表，经培训考核通过后方可进行实验，进出细胞室实验需要严格预约与登记。如有不符合实验室工作和生物安全要求的，实验室负责人和细胞室工作人员有权责令整改。严禁未经许可擅自进入细胞培养室或使用相关设备。
2、 凡进入细胞培养室的人员要有严格的无菌操作概念，任何人员初次使用细胞室必须有本实验室人员陪同指导，待完全掌握操作规定之后方可独立操作。
3、细胞培养室正常使用过程中，实验用品应尽量一次带入，进出细胞室请随手关门。严禁将与实验无关的易燃、易爆及其他有毒有害物品带入细胞室；在本室内不得进行病原性微生物等其它易污染物的操作，禁止从事任何高危生化实验。
4、 实验人员应爱护实验室各类仪器，按照规则使用并保持设备清洁。实验中的昂贵设备，未经许可不得擅自开关。精密仪器需经专门培训后方能操作未经许可不得改变设备仪器的预设参数。设备仪器出现故障或发生事故，应及时向实验室负责人报告，安排专业人员进行检修。
5、 使用仪器前认真阅读“操作规则”，并严格按“操作规则”进行操作，未经管理者同意不得擅自更改仪器程序。使用后仪器恢复原位，并填写“使用情况记录”。如仪器出现故障，请及时通知实验室老师。因操作不当导至仪器、设备、实验器材的损坏，追究实验者责任，并按学校有关规定赔偿。
6、 爱护实验室公共财物，实验耗材由实验者自行提供。节约用电，注意防火防盗，杜绝一切可能导致火灾的行为。
7、禁止在培养室吸烟、进餐，实验过程中严禁喧哗、闲聊，严禁随意反复进出培养室。进入细胞室的实验人员必须遵守清洁卫生值日安排。每月做全面清洁消毒一次，每周扫除两次，超净台上滤网需每月清洗一次。在确认无菌室无人后方可开紫外灯杀菌。 8、具体操作规则详见附录《细胞生物学实验室操作规则》。
细胞生物学实验室操作规则
第一条 常规操作
1. 穿着专用实验服。实验人员必须在细胞室准备间内更换细胞室专用实验服，严禁不穿实
验服进入细胞室。
2. 穿着专用拖鞋。在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。 3．按培养室的要求洗手、将衣服及与实验无关的物品存放在指定地点。
4．细胞室中培养基、胰酶、血清等均分装后专人专用，并做好记录，每个项目组或每位操作者可以携带专用的移动箱，并对自己实验物品需做好标记，未经同意不得擅自使用他人物品，避免交叉污染。不得擅自查看或取出他人培养的细胞或实验记录。本室所有物品用完之后按原样放回，不得擅自借出或带出到其他实验室。 5. 细胞室最多可4个人同时使用。
6．进入核心室要戴手套并用75%酒精或含氯消毒水消毒。必要时需穿戴帽子、口罩、防护服等。
7. 实验暂停，操作人离开时，及时熄灭酒精灯。
8. 每次实验结束后，应及时用75%酒精或含氯消毒液清理桌面、台面、地面。整理好用过的实验器材。清理废弃物，倒空洗净废液缸，废弃物品带出操作间。实验区用紫外线照射30分钟，并做好记录。观察培养箱中CO2的浓度、温度、供气压力等参数，待正常后方可离开。
9．水浴锅内需加无菌水，每两周进行更换并消毒，注意使用完要注意关闭。 10．做好细胞培养记录，以了解细胞生长情况，用于资料的分析和整理。 第二条 培养箱使用规则
1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。 注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。不按规则进行操作造成他人细胞损失，需酌情赔偿。
3. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
4. 培养箱内细胞培养的放置需整洁有序，方便查找，同时应尽量提高培养箱的使用效率，负责老师可视实验情况启用或停止空培养箱的使用，节约资源。
5. 普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。 6. 原代细胞需放置在原代培养专用培养箱培养，不得放置于其他培养箱，如一段时间内无
原代细胞实验，负责人可协调安排培养箱供其他细胞培养使用。
7.观察培养箱实际温度与湿度与设定值是否相符。定期检查CO2气体量是否充足，不足时及时通知细胞室管理员更换CO2钢瓶。CO2气体量密切注意培养箱内的增湿盘，定期更换无菌水并进行消毒。密切注意培养箱内情况，如出现霉变、菌斑、支原体和衣原体感染或其他明显染菌迹象，应立即通知管理员及其它使用者。 第三条 显微镜使用规则
1. 倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2. 使用显微镜后应随手降低光源亮度，使用完毕注意关闭。离开细胞室时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。 3. 一次细胞实验使用完毕后，在显微镜使用情况记录本上登记。 4. 荧光显微镜属于贵重仪器需遵循贵重仪器预约使用规程。 第四条 超净台相关操作规则
1. 超净台使用遵循预约原则。在细胞室入口处预约，细胞室内填写使用登记。
a：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。
b：使用记号笔在预约表格上提前预约下一周的使用时间，请注意周六周日是指上周的周末。 c：预约内容请包括：时间范围，姓名，如特殊实验请写明。
2. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，实验用品从左至右依次摆放，酒精灯居中（生物安全柜禁用酒精灯等带明火的物品）。使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。
3. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。
注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。 4. 超净台中应摆放废液杯，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内加入NaOH溶液处理片刻，废液垃圾倒入水池并同时用水冲释，固体垃圾倒入生物样品专用垃圾桶中 注： 废液缸应及时处理，严禁长时间放置，以免留有大量培养液滋生细菌。
5. 细胞实验后任何含有细胞培养污物的培养瓶，离心管，移液管等必须及时带出细胞房。 第五条 器具的清洗规则
1. 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。
注： 可回收器皿必要时先初步清洁剂涮洗超声后再放入桶内，尤其是培养瓶或血清管中有大量高营养的液体残留时，容易使桶内的清水长菌。保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。
2. 清水冲洗后及时放入酸缸浸泡，应由使用者本人及时清洗晾干备用，操作时请注意带橡
胶手套，小心操作。
注：禁止长时间浸泡于清水中，此时细菌可能已在桶中生长并释放内毒素。细菌内毒素很难通过常规湿热灭菌步骤去除干净，即使干烤也不能保证其完全失活。内毒素对细胞生长及多种实验均有较大影响。
洗涤程序：清水冲十五次以上去除重金属残留，然后冲去离子水5次，再用超纯水3次，倒置于烘箱中晾干，并及时包扎灭菌。 第六条 冰箱、试剂等相关操作规则
1. 从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。严禁长时间敞开冰箱门。
2. 各人存放于冰箱内的培养液、生化试剂、样品要注明姓名、配制日期、样品名称，特殊试剂需获得细胞室管理人员同意后方能放置。不得使用他人的培养液或其他生化试剂。 3. 分装好的血清长时间保存于-80℃，使用前放于4℃预解冻。原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用，若有剩余，则暂存于4℃并尽快使用。尽量不要使用他人开过的血清，以免交叉污染。
4. 细胞室内的冰箱空间有限，尽量仅放置使用频率较高的试剂。请勿将一些闲置试剂，污染试剂长期放置在细胞室。
5. 工作人员会定期对冰箱进行清理，发现无标记，过期试剂等违规物品将全部清除出去，并且查找试剂配置人给予警告。 第七条 进入细胞室物品控制
1. 所有进入细胞室的物品需尽量经过紫外照射，酒精表面消毒。 2. 严禁将可能含有污染物或病原菌的实验物品带入细胞室。
3. 细胞室内仅放置少量实验必须耗材即可，不得整箱搬入，出现洁净室内物品堆积状况。 4. 细胞室内储物柜的物品放置由相关管理人员安排，并做标记。 第八条 细胞室清洁守则
1. 每周值日生时间从周六开始，至下周五结束。
2. 日常维护：注意培养箱显示正常，显微镜，冰箱，超净台的正常使用与维护。细胞室内以及门口生物样品专用垃圾桶的及时清理。
3. 每周值日（安排实验时两次，未安排时一次，周三或周五下午两点）：擦拭超净台（用酒精棉球），用新洁尔灭擦桌面及桌上仪器、拖地，紫外消毒细胞室30分钟。 3. 每月大清洁：每月30日下午两点用新洁尔灭打扫细胞室。
清洁顺序：擦超净台（用酒精棉球）；用新洁尔灭擦桌面，培养箱，超净台以及冰箱外壁，及桌上的仪器，细胞室墙面；给水浴锅加水或换水，细胞室衣柜和拖鞋摆放整齐，拖地，紫外消毒细胞室30分钟。
注：若上周值日生及时给培养箱内水槽加足水，根据经验未来一周内培养箱不会干水，但值
日生仍应经常检查，以便及时发现异常情况。切记给培养箱加灭菌水。
4. 在没有出现问题的情况下，每1个月清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于另一个培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；启动培养箱自消程序。
细胞培养室使用申请表 编号：
申请人： 导师： 性别： 职务：教师/学生 职称/年级： Email： 联系电话： 实验 □原代培养 □ 传代培养 □ 正常体细胞培养 □肿瘤细胞培养 □干细胞培养 内容 克隆培养 □细胞毒性实验 □细胞融合 □ 细胞转染 □其他＿＿＿＿＿＿＿＿ 使用设备 使用时 间 年 月 日 — 年 月 日 出 入 频 率 申 请 培 训 时 间 □每天一次 □每天两次 □一周两次 □一周三次 年 月 日 — 年 月 日 培训□ 需要 安 排 □ 不需要 申请本人承诺：将严格遵守细胞培养室管理规章制度，服从管理；如有违反，人签愿接受相关处罚。 字 签名： 年 月 日 操作予以督促） 导师（请对学生能否申请培训予以确（请承诺对学生使用细胞房过程中的规范意 见认） 及培 训后确认 签字： 年 月 日 签字： 年 月 日 细胞（请对学生能否达到规范使用细胞室予以评价，如同意使用，请填写对使用者的） 室负要求与责任；如不同意使用，请写明具体理由。责人 意 见 签字： 年 月 日 备注 注：本表一式3份，细胞实验室负责人一份，导师和本人一份，实验室委员会存档一份。
