2、尿液脱落细胞的单细胞悬液的制备
（1）用一清洁器皿收集24小时尿液，置4℃冰箱中自然沉淀2小时，轻轻倒去上清液，留下少许带细胞的沉淀物，用吸管移至10-20 ml 离心管中；
（2） 500 rpm 离心 10min ，去上清；
（3） 加PBS液8-10 ml，以1000 rpm 离心10 min ，去上清；重复再洗1 次；
（4） 再加5 ml PBS液混匀，用300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；
（5）再加少许PBS液，混匀。加固定液或低温保存，备用。
3、胸、腹水脱落细胞的制备
（1）抽取胸、腹水50-100 ml ，加入1000 IU/ml肝素液1 ml ，放盐水瓶中置于4℃冰箱中静置6-12 h，弃去上清；
（2） 将底部10-20ml用长吸管移入试管中，用PBS液洗3 次，以1500 rpm 离心沉淀5 min ；
（3）再加5 ml PBS液混匀，用300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；
（4）加少许PBS液，混匀；加固定液或低温保存，备用。
4、冲洗液细胞样品的制备
（1）用300-500 ml 生理盐水冲洗膀胱,冲洗一定时间后,吸出冲洗液放入容器中于冰箱内置6-12 h；
（2）取沉淀液20-40 ml ,离心沉淀并以生理盐水洗2 次, 吸上清；
（3）加10 mlPBS液，混匀；以300目尼龙滤网过滤，离心沉淀去上清；
（4）过滤后1000 rpm,10 min，离心沉淀，去上清；加固定液或低温保存备用。
第2 节样品的荧光标记和检测分析
一、荧光标记原理
定量细胞荧光染色，要求细胞成分染色的均匀性，保证染色做到染料分子数与被染的某种参量成一定的量效关系。在流式定量分析中，掌握好荧光染色液的浓度非常重要。为了更好地说明这个问题，可以用下式表示：
F=Q(I-eεCL)
式中F表示荧光强度，Q表示光量子产额，I表示激发光强度，ε表示消光系数，C表示染色浓度，L表示浓度厚度。当激发光增强时，荧光强度相应按比例增加；当荧光强度达到1.0时，继续增强光密度，荧光不仅不会增加，还会造成结合到细胞上的荧光素发生猝灭现象。一个荧光分子发射的荧光，有可能被邻近的分子吸收淬灭。由于这种淬灭现象，如果再增加荧光染料浓度也不会使荧光强度增大。
1、荧光染料与细胞参量结合的方式
（1）共价键结合：DNA链的连结之间被打开，形成与荧光染料分子共价键结合，这种结合方式不十分稳固，冲洗过多易造成荧光分子丢失。例如异硫氢酸盐荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白（phycoerythrin, PE）等这些荧光染料。
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