问题1：培养液pH 值变化太快
可能原因
（1）CO2 张力不对
（2）培养瓶盖拧得太紧
（3）NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足
（4）培养液中盐浓度不正确
（5）细菌、酵母或真菌污染
建议解决方法
（1）按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到 3.7g/L 浓度NaHCO3 对应CO2 浓度为5％到10％。
（2）松开瓶盖1/4 圈。
（3）改用不依赖CO2 培养液。加HEPES 缓冲液至10 到25mM 终浓度。
（4）在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。
（5）丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变
可能原因
（1）洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来
（2）冰冻保存培养液
建议解决方法
（1）用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。
（2）将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
问题3：培养液出现沉淀，同时pH 发生变化
可能原因
细菌或真菌污染
建议解决方法
丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题4：培养细胞不贴壁
可能原因
（1）胰蛋白酶消化过度
（2）支原体污染
（3）培养瓶瓶底不干净
（4）培养液pH值过碱（NaHCO3分解）
（5）消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
（6）细胞老化（如传代前细胞已汇合导致失去贴附性）
（7）接种细胞起始浓度太低或太高
建议解决方法
（1）缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。
（2）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。（3）注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶
（4）使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2（将培养液敞口放入培养箱也可）（5）重新配置消化液或培养液
（6）启用新的保种细胞
（7）调节最佳接种细胞浓度
