江苏新沂市高中生物第四章生物化学与分子生物学技术实践41蛋白质

2025-07-15

蛋白质的分离与纯化方法 教学目标: 1、知识与技能: 掌握蛋白质的分离与纯化方法, 知道从生物材料中提取芳香油 2、过程与方法: 掌握蛋白质的分离与纯化三种方法的比较过程 3、情感态度价值观: 培养学生科学实验的观点。 教学重点: 蛋白质的分离与纯化 教学难点: 蛋白质的分离与纯化, 从生物材料中提取芳香油 教学方法: 自主、合作、探究学习。 教具使用: 无 共案部分 个案部分 教学教师主导活动 学生主体活动 过程 课前: 布置学习目标和预习提纲,要求学生完 成预习任务,下发及收缴批改导学案(附学生进行预习,完成导学案。 导学案) 课中: 学生对上节存在问题进行讨 对上节课存在问题进行点拨。 论。 新授: 根据学生自学情况,引导学生分析主 要的问题。强调以下几点。 【思维点拨】 1.说明用透析法、离心沉降法和电泳等学生自学基础知识。 方法纯化蛋白质的原理和大致过程。 2.影响电泳泳动速度的主要因素有哪些? 学生根据导学案内容讨论并展示个人、小组成果。 这些因素是如何影响泳动速度的? 3.“血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳”实验最 关键的一步是什么?你能说出这一步的操思考: 作要求吗? 4.漂洗后的薄膜上可以看到几条色带?分 蛋白质的分离常用的细胞破别代表什么? 5.植物芳香油提取的常用方法有哪些?这碎的方法: 些方法的原理各是什么? 【疑难解析 】 1.蛋白质的分离纯化: ①根据抽提方法: 蛋白质溶解度不同的分离方法——蛋白 质的盐析: 中性盐对蛋白质的溶解度 有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓纯化主要是根据: 度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶; 当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不常用的方法: 同程度下降并先后析出,这种现象称盐 析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度 的盐离子(如硫酸铵的SO:一和NH})有很醋酸纤维薄膜电泳的实验的强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化基本步骤: 层,使之“失永”,于是蛋白质胶粒凝结 并沉淀析出。由于各种蛋白质分子颗粒大色带: 小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度

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也不一样,因此调节混合蛋白质溶液中的 中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。 ②根据蛋白质分子大小的差别的分 离方法——透析: 透析法是利用半透 膜将分子大小不同的蛋白质分开。 ③ 根据蛋白质带电性质进行分离——电泳 法: 各种蛋白质在同一pH条件下, 因分子量和电荷数量不同而在电场中的 迁移率不同从而得以分开。值得重视的是 等电聚焦电泳,这是利用一种两性电解质 作为载体,电泳时两性电解质形成一个由 正极到负极逐渐增加的pH梯度,当带一 定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自 等电点的pH位置就停止,此法可用于分 析和制备各种蛋白质。 2.实验原理: 醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维 薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技 术,将血清样品点样于醋纤膜上,在pH 为8.6的缓冲液中电泳时,血清蛋白质 均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白 组分等电点不同而致表面净电荷量不等, 加之分子大小和形状各异,因而电泳迁移 率不同,彼此得以分离。电泳后,CAM经 染色和漂洗,可清晰呈现清蛋白、α1一 球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、 γ 一球蛋白5条区带,比色即可计算出血清学生完成课堂检测 各蛋白组分的相对百分数。 布置学生课堂检测,并重点提示。 课后: 学生完成课外作业及下一节布置课外作业及下一节预习提纲。(见导预习。 学案) 板书生物成分的分离与测定技术 设计 蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法: 抽提方法: 纯化主要是根据: 常用的方法: 醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤: 色带: 教学 札记 三、其他补充教学资料(各位教师根据各班教学特点选择补充资料,可另附纸)

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高二生物生物成分的分离与测定技术导学案

使用时间: 编制人: 一、学习目标:

知道蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法,蛋白质抽提方法,掌握蛋白质的分离与纯化方法。

二、知识构成:

1.蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法有: 根据蛋白质的不同特性,分别可选择哪些抽提方法? 、

、 蛋白质的纯化主要是根据 之间以及 之间在 、 、 、 等方面存在的差异进行的。常用的方法包括 、 、 等。

2.用电泳分离纯化蛋白质时,泳动速度主要取决于 ,即 。此外, 、 等因素对泳动速度也有影响。

3.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤包括: 、

、 、 、 、

、 、 、 、 。

4.浸泡醋酸纤维薄膜前,用笔做记号是在 (填“光泽面”或“非光泽

面”);点样是在 (填“光泽面”或“非光泽面”);平悬薄膜时, (填“光泽面”或“非光泽面”)朝上。

5.经电泳后,可以在薄膜上看到 条色带,它们分别是 、

、 、 、 。 '6.植物芳香油的提取方法有 和 等。 三、学法和自检:

本节内容主要通过看书、分析蛋白质的提取、分离、纯化的不同方法。 动手试一试:

1]盐析法分离蛋白质的原理是 ( )

A.破坏蛋白质的一级结构 B.破坏蛋白质的二级结构 C.破坏蛋白质水化膜而改变溶解度 D.使蛋白质发生变性沉淀

2]利用透析法将蛋白质和其他小分子物质分离的原理是 ( ) A. 利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性 B.利用蛋白质分子的水溶性 C.利用蛋白质分子的胶体性 D.利用蛋白质分子所带电荷 3].下列关于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的说 法不正确的是 ( )

A.实验所用的巴比妥缓冲液的pH为8.6 B.点样是在薄膜的光泽面上进行的 C.实验后可以得到五条色带 D.整个实验最关键的步骤是点样

4].有一混合蛋白质溶液,各种蛋白质的pH分别为 4.5、5.2、6.6、7.2,电泳时欲使其中三种泳向正极,则缓冲液的pH应该是 ( ) A.2.0 B.5.0 C.6.0 D.7.0

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课题 生物成分的分离与测定技术

四、达标检测

1.(多选)在蛋白质粗提取时,破碎细胞的方法有 ( ) A.研磨法 B.超声波法 C.酶解法 D.机械破碎 2.分离水溶性蛋白质所选用的提取溶剂是( )

A.酸性溶液 B.碱性溶液 C.中性缓冲液 D.有机溶剂

3.(多选)纯化蛋白质的原理是根据不同蛋白质之 间以及蛋白质与其他分子之间在哪些等方面存 在的差异进行的 ( )

A.分子大,B.溶解度 C.所带电荷的多少 D.吸附性质

4.某蛋白质等电点为7.5,在pH6.O的缓冲液中进 行自由界面电泳,其泳动方向为 ( )

A.向负极移动 B.向正极移动 C.不运动 D.同时向正极和负极移动

5.在pH 5.12时进行电泳,哪种蛋白质既不向正极 移动也不向负极移动 ( ) A.血红蛋白:pI(等电点)一7.07 B.鱼精蛋白:pI一12.20 C.a1一球蛋白:pI一5.06 D.B一球蛋白:pl=5.12

6.血清蛋白电泳时通常用pH 8.6的缓冲液,此时 各种蛋白质所带的电荷为 ( )

A.清蛋白带正电荷,其他蛋白带负电荷 B.清蛋白带负电荷,其他蛋白带正电荷 C.各种蛋白均带正电荷 D.各种蛋白均带负电荷 7.(多选)支持物电泳常采用的支持物有 ( )

A.滤纸 B.醋酸纤维薄膜 C.大分子凝胶 D.纤维素 五、学习小结和课外作业: 1、学习小结:

2、上本作业:列举蛋白质粗提取时次报的破碎、蛋白质的抽提、纯化方法。

3、课本:64页1 2 3 4 5 4、补充练习:

8.请根据血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验回答下 列问题: (1)实验所用的主要试剂有:

(2)实验所用的缓冲液的pH为 ,因为 。

(3)点样应点在薄膜的 面,方法是用 在血清中蘸一下,在离薄膜一端 cm处轻轻按下,随即提起。

(4)实施电泳时,所用电压为 ,膜宽电流强度 ,时间 。

(5)实验结果时,薄膜上呈 条色带,分别代表 。 9.选择正确答案的序号。、清蛋白一球蛋白、一球蛋白、一球蛋白、球蛋白

A.清蛋白 B.α1一球蛋白 C.α2--球蛋白 D.β一球蛋白 E.γ一球蛋白 (1)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最快的是 ( ) (2)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最慢的是 ( ) (3)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最深的是 ( ) (4)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最浅的是 ( )

(5)正常人血清中的各种蛋白质,在pH8.6的缓冲液中负电性最强的是 ( ) (6)正常人血清中的各种蛋白质,在pH8.6的缓冲液中负电性最弱的是 ( )

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10.醋酸纤维薄膜电泳可把血清蛋白分成五条带,由负极数起它们的顺序是 ( ) A.γ一球蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、清蛋白

B.清蛋白、β一球蛋白、α1 一球蛋白、α2一球蛋白、 γ一球蛋白 C.γ-球蛋白、βB一球蛋白、α2一球蛋白、α1一球蛋白、清蛋白 D.清蛋白、α1一球蛋白、α2一球蛋白、β球蛋白、 γ一球蛋白

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